microRNA（miRNA）表达谱芯片一、背景介绍：MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex,RISC），通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。近些年研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。
鼎赛基因依托Agilent和Affymetrix 二大经典基因芯片平台，为广大科研工作者提供包括人、小鼠、大鼠在内的多种物种的microRNA全基因表达谱研究服务。
1.特殊的颈环探针专利设计，区分成熟miRNA和miRNA前体的芯片平台；
2. 无需分离miRNA，直接用Total RNA 进行实验，只需100ng的Total RNA 即可用来进行标记实验；
3. 样品种类多源：组织、血清、血浆、FFPE、冰冻切片组织、脱落细胞、外泌体等均可进行实验；
4. 高重复探针，每个miRNA至少重复20次
5. 检测灵敏度极高，检测丰度跨5个log，＞6000个拷贝的miRNA就可以检出；
6. 数据来源于miRBase 21.0版本，并方便及时更新；
7. 人、大鼠、小鼠之外的动物物种，可以方便的通过earray进行个性化定制。
三、Affymetrix芯片平台介绍：芯片特点：1.高覆盖度-涵盖miRBase Release 20中所有成熟的miRNA序列；
2.新型的分析-采用同样的芯片可以检测人、小鼠、大鼠或其他物种的miRNA（同时检测203个物种的miRNA）；
3.样本量低-仅需要130ng的total RNA。
4.高灵敏度：检测丰度跨4个log，可以检测到1.0 attomol的microRNA含量。
5.100% 覆盖miRBase v20数据库；
6.30,424个成熟miRNA；
7.5,214个人、小鼠、大鼠miRNA；
8.1,996个人类snoRNA, scaRNA；
9.3,770个探针专门针对人类、小鼠、大鼠前体发夹状序列设计。
四、样品要求：
1.样品类型：细胞、全血或新鲜组织或RNA样品。
2.样品总量：细胞样品请提供至少1×106个细胞，组织样品请提供绿豆大小的组织块，全血样本2.5ml，RNA样品请提供5 μg以上的总RNA。
3.样品质量：RNA无明显降解，提取的总RNA OD260/280值在1.8~2.2之间，浓度 ≥ 500 ng/μl，28S:18S ≥ 1.5，RIN ≥ 7。
4.样品保存：细胞样品加TRIzol保护，新鲜组织块液氮速冻转入-80度或者RNA保存液浸泡后-80度保存，全血样本用PAXgene RNA采血管采集，RNA样品可溶于乙醇或RNA-free的超纯水中，-80℃保存。样品保存期间避免反复冻融。
5.样品运输：样品置于1.5 ml管中，封口膜封好，干冰运输。
五、实验流程:
六、分析内容：
1.基础分析：
2.高级分析：
3.分析展示：
靶基因预测：heatmap图：PCA图：天津鼎赛生物基因科技有限公司技术服务一览天津鼎赛生物基因科技有限公司
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