特别提示：包括动物组织DNA提取试剂盒（磁珠法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：动物组织DNA提取试剂盒（磁珠法)
英文名称：Magnetic Animal Tissue Genomic DNA Extraction Kit
产品货号：WH0121
产品规格：50次|200次|1000次

本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从动物组织样品中分离纯化高质量基因组DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程不涉及有机试剂，安全、便捷，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。使用本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Southern杂交、芯片检测和高通量测序等实验。

产品特点：
·简便快捷：直接裂解，无需孵育时间，1h内即可获得超纯的基因组DNA；
·高通量：可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验；
·安全无毒：无需酚/lǜ仿等有机试剂；
·纯度高：获得的DNA纯度高，可直接用于芯片检测、高通量测序等实验。

提取得率：

样本		zuì适样本量	DNA得率
鼠	脑	25mg	20-30μg
	心脏	25mg	20-30μg
	肝脏	25mg	30-50 μg
	脾脏	25mg	50-70 μg
	肺	25mg	50-70 μg
	肾脏	25mg	30-50 μg
	尾	大鼠0.3cm	50-80 μg
		小鼠0.6 cm	50-80 μg
其他组织类型	肌肉组织	50 mg	5-10 μg
	鱼	50 mg	5-10 μg
	虾	50 mg	5-10 μg
	贝	30 mg	30-50 μg
微量样本	口腔拭子	1个	0.2-1 μg
	干血斑	3片3×3mm	0.2-1 μg

提取实例：

使用本试剂盒按说明书操作对大鼠不同组织、鱼、虾、贝、培养细胞和鸭腿肉等样本进行DNA纯化，洗脱体积为150μl，琼脂糖凝胶电泳上样量范围为1～2μl。提取结果证明本试剂盒具有广泛的样品适用性，尤其对鼠尾、鱼、虾、贝等较难处理的样本效果更佳。

试剂盒组成：

组分	50次	200次	1000次
组织消化液GHA	12ml	50ml	5×50ml
缓冲液GHB	20ml	80ml	5×80ml
缓冲液GDA	25ml	90ml	5×90ml
漂洗液PWD	20ml	2×40ml	5×2×40ml
Proteinase K	1ml	4×1ml	5×4×1ml
磁珠悬浮液G	2×1ml	6×1ml	5×6×1ml
洗脱缓冲液TB	15ml	60ml	5×60ml

储存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中孵育10min，以溶解沉淀。

选配试剂：RNase A（100 mg/ml）（目录号：WH0217）

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。）
1．本产品适用于手工提取或自动化仪器整合。
2．自备试剂：异bǐng醇，乙醇。
3．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
4．若裂解液GHB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
5．如需去除RNA残留，需自备RNase A（100 mg/ml）溶液（WH0217）。

操作步骤：
使用前请先在缓冲液GDA和漂洗液PWD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶子上的标签。

一、手工操作步骤
1．取动物组织10-50 mg，尽量剪成小块，加入200μl组织消化液GHA和20 μl Proteinase K，使用电动匀浆机研磨约10 s至组织研磨充分。
①匀浆后仍有肉眼可见的组织块的样本，建议65℃消化30 min至消化完全；
②对于匀浆充分的样本，可以省去65℃消化的步骤；
③对于鼠尾样本，建议于56℃消化过夜；
注意：样本消化完成后，如果有组织碎片，建议12000rpm离心1 min去除残留杂质。
注意：如果需要去除RNA，加入4 μl RNase A室温放置10min （货号：WH0217，自备)
2.加入300 μl裂解液GHB，振荡混匀。
3.将离心管置于75℃，孵育15 min，期间颠倒混匀3回，每回3-5次。
4.室温放置5 min。
5.加入350 μl异bǐng醇，振荡混匀10 sec。
6.加入30 μl磁珠悬浮液G，振荡混匀1 min，共静置9 min，每3 min振荡混匀1 min。
注意：为了确保磁珠彻底重悬，请在使用前振荡混匀。
对于口腔拭子和干血斑等基因组DNA含量少的样本，建议使用15 μl的磁珠；
对于肌肉组织等基因组DNA含量中等的样本，建议使用20 μl的磁珠；
对于鼠的脾脏等基因组DNA含量高的样本，建议使用30 μl的磁珠。
7.将离心管放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
8.加入700 μl缓冲液GDA（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30 sec。
9.将离心管放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
注意：如果对于DNA纯度要求更高，可以重复步骤8和9一次。
10.加入700 μl漂洗液PWD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），振荡混匀30 sec。
11.将离心管放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，小心吸去液体。
12.重复步骤10和11一次。
13.将离心管于磁力架上，室温晾干10-15 min。
注意：乙醇残留会抑制后续的酶反应，所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥太长时间，以免难以洗脱DNA。
14.将离心管从磁力架上取下，加入100-200μl洗脱缓冲液TB，振荡混匀，置于56℃，孵育10min，期间颠倒混匀3回，每回3-5次。
15.将离心管放置于磁力架上静置2 min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至一个新离心管中，并于适当条件保存。

二、移液法自动化仪器提取步骤
准备工作及注意事项：
1．本产品可整合Hamilton Microlab STAR、Beckman Coulter Biomek® FX等移液法自动化仪器进行高通量基因组提取工作。
2．组织样本的处理：同手工法样本处理，消化完成后转入96孔深孔板内。
3．磁珠稀释液的配制：按照30 μl磁珠悬浮液G加入70 μl异bǐng醇的比例混合，混合后每个样本用量为100 μl。
4．对于Hamilton Microlab STAR类的仪器，有放置2ml离心管的板位，可以不使用异bǐng醇来稀释磁珠，异bǐng醇的加入体积仍为350 μl。每个离心管可以放入1 ml左右的磁珠，吸取磁珠前吹打混匀5次，直接进行30 μl磁珠的分液操作，分液完成后将磁珠管盖盖好保存。
5．对于动物脾脏、肝脏和肾脏等DNA含量丰富的样本，建议裂解后加入异bǐng醇吹打混匀5次以后，再加入磁珠进行混匀，避免磁珠聚集后不易进行充分的漂洗。
6．考虑仪器设定温度和96孔板内的实际温度有一定的偏差，在裂解和洗脱时建议仪器设定温度比实际使用温度高出10℃。
提取步骤：
1．在96深孔板（自备)中加入200μl处理好的组织样本。
2．每孔加入300 μl裂解液GHB，吹吸6次。
3．将深孔板置于75℃，孵育15 min，振荡混匀。
4．将加热模块温度调至25℃，继续振荡5 min。
5．每孔加入270 μl的异bǐng醇，吹吸6次，然后振荡混匀5 min。
6．每孔加入100 μl磁珠稀释液，吹吸6次，然后振荡混匀10min。
7．将深孔板放置于磁力架上静置2 min，磁珠完全吸附后，吸去液体。
8．将深孔板从磁力架上取下，加入100 μl缓冲液GDA，振荡混匀2 min。然后再加入600 μl缓冲液GDA，吹吸6次，然后振荡混匀2 min。
9．将深孔板放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
注意：如果对于DNA纯度要求更高，可以重复步骤8和9一次。
10．将深孔板从磁力架上取下，加入100 μl漂洗液PWD，振荡混匀1 min。然后加入600 μl漂洗液PWD，吹吸6次，然后振荡混匀2 min。
11．将深孔板放置于磁力架上静置30 sec，磁珠完全吸附后，吸去液体。
12．重复步骤10和11一次。
13．将深孔板置于磁力架上，37℃晾干5 min。
14．将深孔板从磁力架上取下，加入100-200μl洗脱缓冲液TB，置于65℃，振荡混匀10min。
15．将深孔板放置于磁力架上静置2 min，磁珠完全吸附后，小心将DNA溶液转移至收集板中，并于适当条件保存。

三、磁棒法自动化仪器提取步骤
准备工作及注意事项：
1．本产品在Thermo KingFisher Flex等自动化仪器上整合成功。
2．组织样本的处理：同手工法样本处理，消化完成后转入96孔深孔板内。
3．将300 μl缓冲液GHB、700 μl缓冲液GDA、700 μl漂洗液PWD和100-200μl洗脱缓冲液TB分别加到96孔板相应的位置上，将30 μl磁珠G加入到700 μl缓冲液GDA中。
4.使用磁棒法仪器也可以按照移液法仪器的操作步骤，需要裂解步骤完成后，设置暂停步骤再加入异bǐng醇。
提取步骤：
1．将处理好的组织样本加入到含有裂解液GHB的96孔样品板里。
2．将96孔板置于自动化提取仪中，75℃孵育15 min，期间中速和快速间隔拍打混匀。
3．仪器暂停后，每孔加入350 μl异bǐng醇，快速拍打混匀5 min。
4．使用磁力套深入到含有磁珠的缓冲液GDA的孔中，快速拍打混匀1 min，吹散磁珠。
5．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
6．将磁珠转移到含有组织消化液和裂解液GHB的孔中，释放磁珠，中速和快速间隔拍打混匀10min。
7．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
8．将磁珠转移到含有第一遍缓冲液GDA的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
9．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
10．将磁珠转移到含有第二遍缓冲液GDA的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
11．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
12．将磁珠转移到含有第一遍漂洗液PWD的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
13．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
14．将磁珠转移到含有第二遍漂洗液PWD的孔中，释放磁珠，快速拍打混匀3 min。
15．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次20 sec。
16．磁力棒吸附磁珠后悬空晾干5 min。
17．将磁珠转移到含有洗脱缓冲液TB的孔中，75℃孵育，快速拍打混匀10min。
18．磁力棒深入到磁力套中，吸附磁珠3次，每次30 sec。
19．将吸附的废弃磁珠转移到含有漂洗液PWD的孔中，拍打混匀1 min。
20．程序结束后，小心将DNA溶液转移至收集板，并于适当条件保存。

DNA浓度及纯度检测：
1．得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2．DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

除了动物组织DNA提取试剂盒（磁珠法),，我公司还供应以下相关产品：



名称：柱式骨骼DNA提取试剂盒
货号：BTN91102
规格：50次
本试剂盒专门用于从动物骨骼(包括骨粉)样品中提取DNA的产品，20次规格足够50次微量提取。

产品特点：
1. 微量提取，一次可以处理300mg左右的骨骼(但需要先将骨粉变成骨粉)。
2. 柱式操作，方法简单，整个过程只需要40-60分钟。
3. 得到的DNA分子量不均匀，一般在20 Kb到100bp之间，具体取决于骨骼的新鲜程度，骨粉的加工方法等。
4. 得到的DNA可以直接用于PCR或荧光PCR反应。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50mL
溶液B	15mL
溶液C	30mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液2.0	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 骨粉的制备：用自备酒精将骨骼表面擦洗干净，以防污染物对后续PCR的影响，然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。对于已经制备好的、商品化的骨粉，可以跳过此步，直接进入下一步。
2. 用天平称取0.2克骨粉，转移到2mL塑料离心管中。
3. 加入1mL溶液A到骨粉中，充分振荡30秒混匀。(注意：溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用，且骨粉加到溶液A中后会特别黏稠，需使劲振荡混匀。)
4. 65℃水浴放置30分钟。
5. 加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备lǜ仿，充分振荡30秒混匀。
6. 12000rpm室温离心3分钟，小心将上清液转移到一个新的塑料离心管中。
7. 加入0.5mL溶液C，颠倒混匀。
8. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要 12000rpm室温离心1分钟，并弃收集管中的穿透液。
9. 加入0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
10. 再加入0.5mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
11. 12000rpm室温离心半分钟，弃含穿透液的收集管。此步干甩十分重要，否则残留的液体会抑制后续的PCR。
12. 将离心吸附柱套入到一个自备的干净的1.5mL塑料离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30μL DNA洗脱液，然后室温放置2分钟。如果先将DNA洗脱液预热到60-80℃再使用，效果更佳。
13. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为骨骼DNA。
14. 取少量进行电泳检测。注意：一般DNA都呈现弥散状，分布在20 Kb到100bp这一广泛的范围，其比例跟骨骼(或骨粉)的新鲜程度、加工过程(对骨粉)等因素密切相关。
15. DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。