羰基测定试剂盒说明书
规格：100T
该产品由军事医学科学院研发监制
一、原理
天然蛋白质分子中氨基酸残基不含有羰基，但活性氧在金属离子的介导下，可使氨基酸残基中自由氨基或亚氨基氧化最终生成NH3和相应羰基衍生物。羰基衍生物可和2，4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯腙衍生物，后者在387nm处有强吸收。通过测定羰基水平可以表征蛋白质分子是否受到活性氧氧化损伤。
二、试剂组成
A. 检测缓冲液（含盐酸胍） 250ml
B. 2、2，4-二硝基苯肼试剂 25ml
三、样品制备
1. 测定每一蛋白质时需要参考有关文献分离提取该蛋白质。
2. 血清和组织液（如关节液、淋巴液）可直接测定。
3. 组织脏器总羰基测定：用20mMpH6.4磷酸缓冲液按20%（W∕V）制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清测定。
四、测定步骤
1．取A试剂和B试剂按9：1体积混合，混合液为AB液。
2．取AB液2.5ml加入0.5ml样品液，于25℃反应30min。
3．对照设置：用2.5ml A试剂加入0.5ml样品液。
4．用分光光度计于387nm测定吸光值。
五、计算
1．蛋白质或酶羰基含量计算
计算公式：(A387*4.348)/0.5ml样品液中蛋白质mg数==µMol/mg蛋白
2．体液羰基含量计算
计算公式：A387*4.348*2=µMol/ml体液
3．组织羰基含量计算
计算公式=A387*4.348*5=µMol/g 组织
六、注意事项及说明
1．A387为387nm处吸光值。
2．用直径为1cm比色杯比色。
3．样品蛋白质浓度要大于5mg/ml。
七、保存条件
室温保存，有效期一年。
