Transwell 侵袭实验主要用于检测细胞体外的侵袭、转移能力的一项常用实验。
基本原理
Transwell侵袭实验是用一层聚碳酸酯膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞接种到低营养的培养液里，通常膜孔都被Matrigel覆盖，模仿细胞外基质，肿liu细胞必须分泌水解酶并通过变形运动才能穿过铺有Matrigel的滤膜，计数进入下室的细胞量可反应肿liu细胞的侵袭能力。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多方面的研究。不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。

实验主要材料和试剂
8.0μm transwell小室、24孔板、棉签;含10% FBS的完全培养，无血清培养基、胰酶、PBS、Matrigel、结晶紫染色液

操作步骤
1、实验前一天，将已经分装后的一管Matrigel基质胶从-20℃提前放入4℃冰箱过夜，Matrigel胶即从固体状态融化为液体状态。
2、包被基底膜：Matrigel基质胶以1：8稀释后包被transwell小室底部膜的上室面(整个过程注意冰上操作，否则Matrigel在10℃以上即会凝固)，3小时风干。
3、水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50μL 10g/LBSA的无血清培养液，37 ℃，30min。
4、常规胰酶消化细胞，PBS洗1-2遍去除血清的影响，用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度为5*105个/mL。
5、取200μL细胞悬液加入Transwell小室上室， 24孔培养板下室内加入600μL 含10% FBS培养基。注意下层培养液与小室之间不要产生气泡。
6、培养板置于37℃的CO2培养箱中，依据肿liu细胞侵袭能力而定培养12-48h。
7、取出小室，PBS淋洗2遍，用棉签小心擦去小室微孔膜上层内的细胞，在24孔板内4固定20 min，结晶紫溶液染色15 min。
8、倒置显微镜下拍照，每个样本随机计数10个视野，取平均值，统计分析。

注意事项
1、细胞接种剂量不同的细胞，其侵袭能力是不同的，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，最后会难以统计结果;而细胞量过少，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，进入下室。因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。



transwell实验的应用：
（1）共培养体系：
小于 3.0um 孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择 3.0µm 以下孔径。常用 0.4、3.0µm。
（2）趋化性实验
可用 5.0、8.0、12.0µm 膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
1）细胞 B 对细胞 A 的趋化作用：将细胞 A 种于上室，细胞 B 种于下室，可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的趋化作用。
2）趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
（3）细胞迁移实验
常用 8.0、12.0µm 膜，上室种细胞，下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。
（4）细胞侵袭实验
常用 8.0、12.0µm 膜，原理与细胞迁移实验类似。

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