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大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞

价格：￥1

品牌：xuanya

产地：美国/中国

最新更新日期：2021-07-12 16:53

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上海烜雅生物科技有限公司

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产品属性

保存条件

-20℃

保质期

两年

英文名	E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell

数量

900

供应商	上海烜雅生物科技有限公司

规格

0.1mL×10

产品说明

大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞产品及特点：
本产品是大肠杆菌 BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于 DNA 的热击转化。使用 pUC19 质粒检测本产品，转化效率可达 107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以 T7 RNA 聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7 噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体 DE3 区的 lacUV5 启动子，该区域整合于 BL21 的染色体上。
菌株基因型为：F - ompT hsdSB(rB -mB - ) gal dcm (DE3)

大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞运输及保存：
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞使用方法
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞注意：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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