黄曲霉毒素B1 ELISA快速检测试剂盒
一、产品概述
黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性。主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织的癌症研究机构划定为类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。产生黄曲霉毒素的霉菌（如黄曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，黄曲霉的污染可以发生在植物的生长、收获和加工、储藏、运输等过程中、及时发现污染源是最好的预防黄曲霉毒素污染的方法。
二、试验原理本产品是利用免疫竞争法检测原理建立的一种定量检测试剂盒。具有简单、快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在农场、饲料混合车间等实地进行测定。结果准确，灵敏度度为0.05ppb，准确率大于95% 。
三、适用范围适用于谷物、饲料等样板中的黄曲霉毒素B1的检测。
四、使用单位需自备的设备及试剂仪器
—酶标仪450nm
—过滤漏斗
—微量移液器20μl～200μl，100μl～1000μl
—刻度移液管
—天平：感量0.01g
—50ml离心管或25ml锥形瓶
—定性滤纸
试剂
—甲醇
—蒸馏水
五、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块 （包被有偶联抗原）
2、标准液×6瓶：（2ml/瓶）
0ppb,0.05ppb,0.25ppb,0.75ppb,2.25ppb,6.75ppb3、酶标二抗 12ml
4、抗体工作液 7ml
5、底物液A液 7ml红 ……
6、底物液B液 7ml ………………
7、终 止 液 7ml ………………
8、20×浓缩洗涤液 25ml ………
9、稀释液缓冲液50ml×2瓶……………
10、自封袋 1个
六、溶液的配制配液1： 洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。
配液2：提取液: 根据实验所需的量配制60%的甲醇水溶液（水要用蒸馏水或无菌水）
七、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
（c）未处理的样本冷冻保存。
1. 玉米、花生等谷物
2. 饲料
操作步骤：
1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（24-27℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本：加标准品/样本50ml到对应的微孔中，再加入抗体工作液50ml/孔，轻轻振荡混匀，置37℃避光环境中反应30min（见注意事项9）。
6、洗板：小心揭开盖板盖，将孔内液体甩干，再在纸上拍干。每孔加250ul洗涤工作液，等待5 s，甩掉，在吸水纸上拍干。再重复此步骤3次。（注意：1.此次洗涤很重要，洗涤次数一定要4次，并且每次甩完液体都要在吸水纸上拍干；2. 第一次加洗涤液若是从A1孔加到A12孔, 那下次加洗涤液的顺序就反过来，从A12孔加到A1孔）。
7、加酶标二抗：加入酶标二抗100ml/孔，轻轻振荡混匀，
置37℃避光环境中反应20min。取出甩掉板内液体，再在吸水纸上把板内残液拍干，重复步骤6。
8、显色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/
孔，轻轻振荡混匀，置37℃避光环境反应15min，不能先加B液,再加A液（见注意事项7）。
9、测定：加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。
10．
计算：公司提供了简便准确的软件,可来电索取。
九、 结果判定结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含黄曲霉毒素B1成负相关。
1、用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.410，样本2的吸光度值为0.920，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.160；0.05ppb为1.701； 0.25ppb为1.342； 0.75ppb为0.869；2.25ppb为0.431；6.75ppb为0.183。则样本1的浓度范围是2.25ppb-6.75ppb，样本2的浓度范围是0.25 ppb-0.75 ppb,
再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中黄曲霉毒素B1残留的浓度范围；
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B
0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素B1标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,
乘以其对应的稀释倍数即为样本中黄曲霉毒素B1实际残留量。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。
十、产品特性1）试剂盒灵敏度: 0.05ppb
2）试剂盒变异系数：小于20%。
3）试剂盒准确度：回收率范围在80％-110％之间。
十一、注意事项1、室温低于24℃或试剂及样本没有回到室温（24-27℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
5、储存条件
保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A
450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
7、在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长），但不得超过25min。反之，则减短反应时间。
8、
该试剂盒最佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。9、
若显色较低,也可在加完抗体工作液后,反应时间由30min延长到35-45min.十二、贮藏条件及保存期 贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
- 保存期：该产品有效期为12个月
