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TA克隆

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最新更新日期：2021-07-13 01:07

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北京擎科生物科技有限公司

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TA克隆

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TA克隆

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TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）把PCR片断与T载体DNA连接起来的方法。通过PCR的方法扩增目的基因片断，往往由于缺失或其他原因无法获得准确的DNA序列，通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，使用通用引物测出准确DNA序列。由于在PCR过程中，使用的DNA聚合酶不同，往往分为2种情况：
（1）使用Taq酶，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。
（2）使用高保真的DNA聚合酶，如pfu酶，由于其不能在扩增产物的3末端加上A，得到的DNA序列为钝端，因此，需要在回收纯化后进行加A的过程，通常是以PCR回收产物为模板，加上一定量的普通Taq酶和反应液，加入dATP（或dNTP）， 72℃ 10分钟，然后将加A产物直接用于TA连接。