| 英文名 | MagCapture™ RNA Pull Down Assay Kit |
| 保存条件 | -20℃ |
| 规格 | 10次 |
MagCapture™RNA Pull Down检测试剂盒
本试剂盒包含新型链霉亲和素样蛋白Tamavidin® 2的突变体、可洗脱的生物素样Tamavidin® 2-REV的固定化磁珠以及Wako专用的洗脱用缓冲液。
本品可应用于生物素化RNA（bait RNA）的RNA Pull Down，所拉下来的含有生物素化RNA的核糖核蛋白（RNP）复合物无需变性，即可通过生物素竞争性洗脱回收。
因此，与使用SDS等变性剂的洗脱法相比，本试剂盒优势为可减少目的蛋白中的非特异性蛋白。可有效应用于对于确定与目的RNA相互作用的蛋白以及功能未知的新型长链非编码RNA（lncRNA）的功能分析。
◆Tamavidin® 2-REV~和生物素可逆结合功能
Takakura, Y. et al.: "Tamavidin® 2-REV : an engineered tamavidin with reversible biotin-binding capability.", J. Biotechnol., 164(1), 19-25(2013).
Tamavidin® 2-REV是新型链霉亲和素样蛋白Tamavidin® 2的突变体。通过减低与生物素的亲和力，可以形成可逆性的生物素结合复合物。因此，通过添加过量的生物素，可以竞争性洗脱生物素化分子。
（传统的链霉亲和素（抗生物素蛋白）和生物素的结合力非常牢固，发生不可逆的结合。）
试剂盒内容 10次反应 |
|
RPD捕获磁珠——500 μL RPD洗涤缓冲液——55 mL RPD细胞裂解缓冲液——25 mL RPD重组缓冲液——1500 μL RPD生物素洗脱缓冲液——1000 μL |
◆操作步骤概述
◆应用数据 ~以HOTAIR RNA※ 进行RNA Pull Down分析～
※HOTAIR是一种与肿瘤发生密切相关的lncRNA
|
银染 bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链 洗脱：Sample Buffer、4%SDS溶液、 洗脱：试剂盒附带的生物素溶液 样本：K562细胞（1×107 细胞）的总细胞裂解液 Western Blot 一抗：抗Ezh2抗体 二抗：抗兔IgG（Fc）单抗，POD结合 二抗：（Code No. 016-23943） 与传统产品相比，本试剂盒可获得低背景的RNA结合蛋白。 |
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
MagCapture™ RNA Pull Down 检测试剂盒 | 基因研究用 | 10 次 |
◆MagCapture™ Tamavidin® 2-REV
◆MagCapture™ HP Tamavidin® 2-REV
本品是Tamavidin® 2-REV固定化磁珠，有两种不同的粒径。
※ MagCaptureTM HP Tamavidin® 2-REV 为小粒径型。
应用数据 ～以HOTAIR RNA进行RNA Pull Down分析/MagCapture™Tamavidin® 2-REV
|
与Streptavidin的性能比较 银染 bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链 洗脱：Sample Buffer 样本：K562细胞（5×106细胞）的总细胞裂解物 Western Blot 一抗：抗Ezh2抗体 二抗：抗兔IgG（Fc）单抗， 二抗：POD结合（Code No. 016-23943） 与普通Streptavidin产品相比，本试剂盒可获得低背景的 RNA结合蛋白。 |
应用数据～以HOTAIR RNA进行RNA Pull Down分析/MagCapture™ HP Tamavidin®2-REV
|
与MagCapture™ Tamavidin® 2-REV比较回收量 银染 bait RNA：生物素标记HOTAIR RNA正义链 洗脱：Sample Buffer 样本：K562细胞（5×106细胞）的总细胞裂解物 Western Blot 一抗：抗Ezh2抗体 二抗：抗兔IgG（Fc）单抗， 二抗：POD结合（Code No. 016-23943） 通过使用MagCapture™ Tamavidin® 2-REV，RNA蛋白的 回收量提升了（SDS sample buffer洗脱） |
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 包装 |
MagCapture™ Tamavidin® 2-REV RNA回收试剂 | 基因研究 | 2 mL | |
MagCapture™ HP Tamavidin®2-REV RNA回收试剂 | 2 mL |
◆重组Tamavidin® 2系列
本系列产品是从榆黄蘑（Pleurotus cornucopiae，蘑菇的一种）中克隆的链霉亲和素样生物素结合蛋白Tamavidin® 2的突变体。对比野生型的Tamavidin® 2，本系列产品各有优势，可根据用途选用对应的产品。
产品名称 | 等电点（pl）※1 | 耐热性※2 | 有机溶剂耐受性 | 生物素结合速度常数 (ka(M-1S-1)) | 生物素解离速度常数 | 分子量 |
Tamavidin® 2 | 7.4 | Tm=85℃ | 有 | (1.0±0.5)×106 | 低于检测下限※4 | 约60 kDa |
Tamavidin® 2-REV | 8 | Tm=75℃ | - | (1.3±0.5)×106 | (1.5±0.4)×10-5 | 约60 kDa |
Tamavidin® 2-HOT | 7.23 | 耐热性高 | 耐受性高※3 | (3.0±1.7)×105 | 低于检测下限 | 约60 kDa |
※1 等电点：只有Tamavidin® 2-LPI是实测值。其余是根据氨基酸序列计算得到的数值。
※2 耐热性(Tm值)：加热20分钟后，生物素结合活性为加热前50%时的温度。Tamavidin® 2-HOT，
※2 耐热性(Tm值)：在99.9°C下，加热30分钟后结合活性依然保持在90%以上，因此无法计算其Tm值。
※3 耐受性高：40-50％ DMSO中。
※4 检测界限值：5×10-6(kd(S-1))
产品编号 | 产品名称 | 特点 | 规格 | 包装 |
Tamavidin® 2, recombinant | 免疫化学用 | 5 mg | ||
Tamavidin® 2-REV, recombinant | 与生物素的可逆性结合 | 免疫化学用 | 1 mg | |
5 mg | ||||
Tamavidin® 2-HOT, recombinant | 超耐热·耐有机溶剂 | 5 mg |
根据有关许可，Tamavidin® 是日本Tabako产业株式会社的注册商标。Tamavidin® 由日本Tabako产业株式会社授权给FUJIFILM Wako进行销售。
