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2021-07-13 04:42
我要认领上海和序生物科技有限公司
李老师
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产品说明
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。实验原理将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。实验流程免疫荧光单标记方法免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。1、所需材料与试剂a, 培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%-70%的细胞。b, 一抗、FITC或TRITC标记的二抗。c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃预冷20 min)。d, 封闭液。e, 0.01mol／LPBS缓冲液。2、染色方法a, 取出培养有细胞的盖玻片或glass-bottom培养皿，用0.01MPBS洗2-3遍。b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rainc, 加入4%多聚甲醛试问固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min。d，正常阻断血清1:20封闭试问20-30 min，抑制IgG的非特异性结合。阻断血清必须选择与二抗同一种属的正常血清。e, 去掉正常血清，直接加入一抗，37℃孵育1 h或4℃过夜。抗体以0.01 mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min，0.3% TritonX 5 min，0.01 M PBS洗5 rain。g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。h, 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min，用滤纸吸干。i, 90%甘油(PBS配制)封片。j, 激光扫描共焦显微镜下观察，或于4℃避光保存。免疫荧光双标记方法免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子，当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些，首先应注意所用的一抗必须是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如：A抗体为多克隆抗体，来自家兔；B抗体为单克隆抗体，来自小鼠)。其次，两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠，且尽量远离，通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下，染色时两种一抗可以同时孵育，然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱，而另一种颜色比较强时，应考虑先孵育颜色较弱的二抗。其他步骤同免疫荧光单标记。客户提供细胞株或细胞爬片。注：细胞爬片不宜太密；细胞必须固定。组织切片，一抗公司提供基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析，荧光显微镜或共聚焦显微镜拍摄实验周期：2-3周 
