Enhanced Chemiluminescent Kit User Manual

【重要信息】
一抗工作浓度：0.2—1.0 ug/ml；二抗工作浓度：10—50 ng/ml
使用比例：Solution I : Solution II = 1:1；10 cm² 转印膜使用1—2 ml工作液
【产品说明】
本产品是超敏型化学发光试剂盒，用于检测辣根过氧化物酶（HRP）标记的目标条带，检测灵敏度达到pg级。试剂盒由溶液I和溶液II组成，使用前等体积吸取，混合均匀即可对转印膜进行显色。由于优化了底物组成，使用了新型高效Enhancer，发光强度比传统ECL显色液提高了30倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了kit稳定性，4℃可稳定放置1年。工作液被HRP催化后，发出特定波长荧光，可对X光胶片曝光，也可直接使用荧光CCD 扫描。
【操作步骤】

• 根据常规操作转印结束后，进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤，根据膜的大小，按每10cm²膜使用1-2ml工作液，按比例吸取等体积溶液I和溶液II混匀，配制成发光检测工作液。
• 用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体。膜的蛋白面朝上，置于洁净保鲜膜上。用移液器将工作液加到转印膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。
• 用平头镊夹起转印膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，用小块透明胶带粘住四角，固定在X光片暗盒内。
• 在暗室中取一张X光胶片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30秒至1分钟。立即显影定影，根据其曝光强度，缩短或延长下一张X光胶片的曝光时间。如果背景过高，可以使用两张X光胶片同时压片。
• 如果需要使用CCD拍照，可以将膜放置于工作液中，开机后再按照使用说明，将转印膜取出，进行拍照。