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Smad2/3

￥1
上海烜雅
国产/进口
2021-07-13 06:18
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上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司
黄经理
18701994219 021-62457717
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1517347860
产品属性
免疫原详见说明书
亚型IgG
形态Lyophilized or Liquid
保存条件避光-20℃，保存一年
克隆性详询
标记物详询（烜雅可供应生物素、酶、荧光素标记的抗体）
适应物种h，R，m，r
保质期一年
抗原来源Polypeptide
目录编号XY-KT-2984
级别生产厂家
数量100
供应商上海烜雅生物科技有限公司
宿主Rabbit，mouse
应用范围ih，wb
浓度1mg/ml
靶点详见说明书
抗体英文名Smad2/3
抗体名Smad2/3
规格100ul
产品说明
Smad2/3抗体产品资料：
适应物种：h，R，m，r
级别：生产厂家
纯度：＞95%
浓度：1mg/ml
分子量：详见说明书
形态：Lyophilized or Liquid
克隆类型：Polyclonal
规格价格：请直接联系我司客服详询
说明书：请直接向我司客服索取

免疫组化常见问题及对策
免疫组织化学是应用抗原和抗体结合的原理，检测细胞内多肽、蛋白质等大分子物质的 分布。这种方法的特异性强、敏感度高、发展迅速、应用广泛，成为生物学和医学众多学科 的重要研究手段。作为初次使用本公司的抗体从事免疫组化的客户可能遇到许多问题，大体 归纳起来，主要有非特异性着色﹑着色部位不对﹑假阳性﹑无阳性﹑阳性弱五大类以及其他 一些小问题。现在就以上几点分别说明。
非特异性着色
非特异性着色就是在理论着色区域外的着色，这种着色与背景是有区别性的。

 主要原因：
  1. 标本原因，肝肾内源性生物素含量高，与 SABC 结合导致非特异性着色，皮肤肺组织胶 原含量高，由于胶原带负电荷，易吸附试剂导致非特异性着色。
  2. 切片干涸导致的边缘效应。
  3. 抗体浓度过高。
  4. 组织在处理中存在出血区域坏死区。
  5. 洗涤不充分。
  6. 显色剂氧化，显色时间长。
解决方法：
  1. 一抗应做浓度梯度，选择阳性强，背景好，信躁比高的浓度，作为抗体实验浓度；二抗浓 度和时间一般不变。
  2. 稳定实验条件，严格按操作说明进行。
  3. 在实验中应保持切片始终处于水平状态避免抗体流失，避免切片干涸。
  4. 在实验中应将试剂覆盖面积大于切片面积。
  5. 洗涤要充分，在背景十分深时，可用 37℃预温的 PBS 浸泡
  6. 防止显色剂的氧化，尤其是配制显色剂使用的容器，最好是灭菌过的；显色时间应在显微 镜下严格控制。

着色部位不对
情况一：本是胞浆抗原有着色，但实验结果显示在胞核有着色。

原因及解决办法：
  1. 修复时间过长，修复条件十分严苛，这时应降低反应强度，减少修复时间。
  2. 组织在二中静置时间过长，这时应更换标本。
  3. 抗体中含有抗核蛋白抗体，这种情况已不多见。
  4. )标本原因，标本处理不慎会导致总在同一个地方出现着色。
情况二:本是胞核抗原但显示结果却在胞浆。

原因及解决办法：
  1. 核抗原不易暴露，需用热修复或延长修复时间来充分暴露。
  2. 蛋白质是在胞浆翻译的，再转运至其他部位，所以出现浆着色也属正常。

情况三:本是胞膜抗原但显示结果却是在胞浆和胞膜都有着色。


原因：蛋白质是在胞浆翻译的，再转运至其他部位，处于转运过程中的膜蛋白有可能显示在胞浆。
假阳性
如不加一抗也有阳性信号
主要原因：
二抗引起的交叉，球蛋白是一个超家族，哺乳动物种属来缘近的容易发生交叉反应。如：羊 抗兔抗体可与兔标本中球蛋白反应，二抗羊抗小鼠也可与大鼠，小鼠中的球蛋白起反应，尤 其在修复的情况下。
无阳性

主要原因：
1.抗原稳定性问题，由于许多蛋白质半衰期短易被破坏，如 P53 半衰期只有 30 秒而 PCNA 等抗原稳定。
2.标本制作过程中烤片时间过高时间过长，标本制作不规范。
3.实验中漏加试剂，实验操作不规范。
解决方法：
  1. 在标本固定中应该严格操作，做到及时固定。
  2. 在浸蜡时温度不要太高，时间不要过长。一般 2 小时×2 次。烤片温度一般在 60℃左右 30 分钟。
  3. 实验中要严格按照实验步骤操作。在所做指标既有单抗又有多抗时，要将一抗和二抗严格 对应。
阳性弱


原因及解决方法：
  1. 一抗浓度过低，解决方法：提高一抗浓度
  2. 孵育时间过短，解决方法：按说明书严格操作
  3. 抗体流失，解决方法：补加抗体
  4. 显色时间过短，解决方法：在显微镜下控制反应时间
  5. 抗原修复方法不当，抗原修复有许多种方法，如：修复、消化，不消不修，寻找适合的方 法是解决阳性弱的有效方法之一

其他问题及注意事项
  1. 在实验中尤其在修复后切片容易脱片，切片脱片的原因是什么？
 答：切片原因有以下几点。1.切片没有经过防脱片处理。2.在切片后没有及时烤片。3.修复 时间过长。
  1. DAB 中 A 液无颜色或颜色很深是否影响实验结果？
答：DAB 的颜色深浅一般不影响实验，因为 DAB 中含有保护剂，每一批保护剂的颜色都不 太一样，好的 DAB 颜色变深一般与氧化剂的存在有关
  1. 冬天气温低洗涤不充分，可能出现背景高， 应对方法用 37℃欲温 PBS 洗涤
  2. 抗体是否能做兔标本 答：以说明书为准，一般能做人、大鼠、小鼠也可能做兔，这是由于种属亲缘关系决定的

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