荧光定量PCR是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测，并以Actin或GAPDH等管家基因作为内参，对目的基因的表达量进行半定量检测。
检测方法：
1. SYBR Green荧光染料法：适用于任何DNA，无需探针，采取双标准曲线法，实验周期短，结果重复性好灵敏度高。
2. TaqMan荧光探针法：经验丰富的实验技术人员设计探针，对目标基因有高特异性，实验重复性好，相对于SYBR Green法，灵敏度更高。
服务内容：
1. 绝对定量：绝对定量须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作3个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起始拷贝数）分析。
2. 相对定量（mRNA表达量分析）：基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
服务流程：
1. 总 RNA 提取及定量；
2. PCR 引物设计及反转录；
3. 荧光引物设计（SYBR Green 荧光染料法）/探针设计（TaqMan 荧光探针法)；
4. 荧光定量PCR，进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验；
5. 数据分析与处理。
实验价格和周期：

项目流程	内容	价格
DNA提取	基因组为模板的定量实验	80元/样本
RNA提取	RNA为模板的定量实验	100元/样本
逆转录	逆转录反应	40元/样本
引物设计合成	引物优化设计及合成	150元/基因
TaqMan探针设计合成	探针优化设计及合成	1200元/基因
标准曲线制作	绝对定量	PCR产物标准品：300元
		质粒标准品：400元
荧光PCR检测	目的基因	90元/反应/3次重复
	内参基因

样品要求：
1. 样品可提供组织、细胞、RNA、cDNA中的一种，对于提供样本的大致原则如下：组织样本，尽可能提供2×2×2mm³体积或以上，新鲜组织可直接提供，不需处理；对于细胞样本，尽可能提供3×10⁶个细胞左右，加适量Trizol处理即可，确保样品适于RNA抽提。RNA、 cDNA含量根据同等细胞数量的细胞抽提和逆转录大致界定，如提供RNA或cDNA需对您提供的材料进行评估。
2. 客户提供尽可能详细的背景信息，如物种、待检测目的基因的NCBI号等。
3. 运输要求，液氮或干冰保存寄送。
注：样本应避免各类污染和反复冻融。
提交的产品和资料：
1. RNA浓度及荧光定量PCR原始数据及分析结果；
2. 荧光定量PCR完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。