利用本服务可以构建得到在真核细胞中表达shRNA的载体。首先选定shRNA序列，设计shRNA正义反义链以loop相连的目的序列，通过人工合成基因的办法克隆于相应的慢病毒表达载体中，将载体转化到宿主菌中进行克隆、筛选，得到质粒重组体即shRNA表达载体。shRNA表达载体在真核细胞中可产生shRNA，从而在细胞内产生特定基因的沉默效果。此方法是多种shRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。洛成生物为您提供shRNA高效表达慢病毒载体构建服务。
基本步骤：
- 根据用户提供的shRNA基因序列信息，设计shRNA序列及引物；
- 含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取；
- 共转染293T细胞；
- 培养48~72h，收集培养上清；
- 病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）；
- 滴度测定、目的基因检定；
- 将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。
用户提供：
- 您选定的shRNA序列信息或靶基因的详细信息，我们为您免费设计shRNA序列；
- 选择的细胞系和详细的细胞培养的操作步骤；
- 抗体（如果需要Western blot检测）；
- 其他具体需要的服务项目，特殊要求。
结果交付：
- 实验操作说明、电子版的测序结果及彩图、实验中所有的原始结果图及数据；
- 构建好的shRNA慢病毒表达载体质粒及其穿刺保存菌、试验中所用引物等。
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