Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。在细胞发生凋亡时,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧。Annexin V与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,因而与细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸结合。由于在发生凋亡时,磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的改变,因此,与DNA碎片检测比较,使用Annexin V可以更早地检测到凋亡细胞。因为细胞坏死时也会发生磷脂酰丝氨酸外翻,所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料(如PI或7-AAD)合并使用,来区分凋亡细胞(Annexin V /核酸染料-)与死亡细胞(Annexin V /核酸染料 )。
操作步骤
1. 收集待测细胞,调整细胞悬液浓度后接种细胞培养板;
2. 根据实验条件设置加入药物处理细胞,继续培养至检测时间点;
3. 收集细胞,分别加入Annexin V-FITC、PI染料避光孵育;
4. PBS重悬细胞,上流式细胞仪进行凋亡检测。
客户提供
1. 提供药物处理方式及检测时间点等;
2. 若客户提供细胞:25T细胞培养瓶,灌满培养基新鲜运输或提供细胞冻存管,干冰运输
我们提供
1. 流式检测凋亡原始图片;
2. 详细实验报告,包含所需试剂耗材、仪器设备、操作过程;
3. 细胞凋亡结果分析