cDNA末端快速扩增技术(
rapid amplification of cDNA ends,
RACE)是一种基于反转录PCR,从部分已知的cDNA序列扩增出其未知部分的5′端和3′端的cDNA序列的一种方法。RACE实验成功的关键在于完整的反转录产物及特异性佳的接头引物。作为一家从事生物技术产品的开发及销售的新型科技企业,本公司验发了国内第一款基于SMART原理的RACE试剂盒(SURPERSWITCH™ PCR cDNA合成试剂盒)。与Clontech的SMARTer™ PCR cDNA Synthesis Kit使用单一接头不同的是,本公司研发的SURPERSWITCH™ PCR cDNA合成试剂盒针对动物、植物和病毒等不同来源的生物材料设计了各自专用的接头引物,配合优化的反转录缓冲液及专用的稳定剂,在最大程度上保证了M-MLV反转录酶的末端转移酶活性,以有效地合成最完整的RACE产物。反转录步骤后合成的第一链cDNA可直接用于5'和3' RACE,无需再进行繁复的第二链cDNA合成和接头连接的过程。
目前本公司已经分别为中国科学院、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位提供了RACE技术服务,涵盖包括家蚕、小熊蜂、鸡、鸽子、牛、羊、猪等动物材料,水稻、烟草、拟南芥、油菜、大蒜、百合、等植物材料,和动物及植物病毒等多种材料。
服务流程
1. 总RNA提取与质检;
2. 已知序列的验证;
3. 合成5'和3' RACE-ready cDNA第一链;通过LD-PCR分别进行5' 和3' RACE。
4. 基因未知序列验证。
试验周期
6~8周内完成。如遇总RNA难以抽提的材料或基因表达量较低的样品会与客户协商约定样品试验时间。
结果提交
试验完成后公司应向客户提交如下试验结果数据:
1. 试验中用到的所有重要设备的制造厂商、型号、操作参数,以及所有重要试剂的供应商等;
2. 所有试验操作的步骤一份;
3. 各部分的试验结果数据,包括:
RACE试验的凝胶图片和测序报告(测序彩色波形图、序列碱基图);
含未知末端片段的质粒及甘油菌。
由于不同基因在不同组织中存在时空特异性表达,其基因全长序列也不会完全相同。公司提供的试验结果仅对客户提供样本负责,并提供试验图片佐证测序结果。此外,由于不同基因mRNA可能存在单核苷酸多态性位点或不同的剪接形式,针对这些类型产物的测序结果准确性由客户自行判断。