一、树突状细胞识别试剂
（一）三色检测
⑴lineage cocktail 1 FITC (340546)
包括CD3 CD14 CD16 CD19 CD20 CD56
阴性选择DC细胞，排除非DC细胞的白细胞（CD3 T细胞；CD14单核细胞；CD16粒细胞；CD19 B细胞；CD20成熟B细胞；CD56NK细胞）。
⑵CD123(Anti---IL-3Rα)PE(340545)
识别淋巴来源的DC细胞（DC2）
⑶Anti---HLA-DR PerCP(347364)
DC细胞非特异性表标物（MHCII类抗原）
⑷CD11c PE（347637）　
识别髓系来源的DC细胞（DC1）
⑸MouseIgG1 PE (349043) MouseIgG2a APC(340473) 阴性对照 
三色试剂检测用于识别总的DC细胞。
（二）四色检测
⑴lineage cocktail 1 FITC (340546)
⑵CD123(Anti---IL-3Rα)PE(340545)
⑶Anti---HLA-DR PerCP(347364)
⑷CD11c APC(340544)
⑸MouseIgG1 PE (349043) MouseIgG2a APC(340473) 
 四色试剂检测用于识别DC1和DC2型细胞。
（三）树突状功能检测试剂
CD1a CD80 CD83 CD86
树突状细胞在分化成熟过程中,MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子、CD80、CD86表达上调．成熟后表达CD１a和CD83，故这两个指标是人成熟树突状细胞的标志．

二、样本制备：
（一）全血
1、在各试管中加入如下图所示抗体。

	FITC	PE	Percp	APC
4-color Assay
Tabe 1	Lin1 20ul	CD123 5ul	Anti-HLA-DR 10ul	CD11c 5ul
Tabe 2	Lin1 20ul	Mouse IgG1	Anti-HLA-DR 10ul	Mouse IgG2a
3-color Assay
Tabe 1	Lin1 20ul	CD123 5ul	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 2	Lin1 20ul	Mouse IgG1	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 3	Lin1 20ul	CD11c 5ul	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 4	Lin1 20ul	Mouse IgG2a	Anti-HLA-DR 10ul

2、在试管中各加入100ul全血。充分混匀，避光孵育15分钟。
3、在各试管中加入2ml溶血素，充分混匀，避光孵育10分钟。
4、高速离心1200转/分*5分钟。弃上清。
5、加入1mlPBS混匀。再高速离心1200转/分*5分钟。弃上清。
6、加入300ul 1%多聚甲醛。
7、上机分析。
注：处理后的样本如暂不上机分析，应2-8度保存。样本放置时间不超过24小时。
（二）PMSC
1、在各试管中加入如下图所示抗体。

	FITC	PE	Percp	APC
4-color Assay
Tabe 1	Lin1 20ul	CD123 10ul	Anti-HLA-DR 10ul	CD11c 5ul
Tabe 2	Lin1 20ul	Mouse IgG1	Anti-HLA-DR 10ul	Mouse IgG2a
3-color Assay
Tabe 1	Lin1 20ul	CD123 10ul	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 2	Lin1 20ul	Mouse IgG1	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 3	Lin1 20ul	CD11c 5ul	Anti-HLA-DR 10ul
Tabe 4	Lin1 20ul	Mouse IgG2a	Anti-HLA-DR 10ul

2、在各试管中加入50ul外周血单核细胞充分混匀，冰孵25分钟。
3、加入1mlPBS充分混匀，高速离心1200转/分*5分钟。弃上清。
4、加入300ul 1%多聚甲醛
5、上机分析。
注：处理后的样本如暂不上机分析，应2-8度保存。样本放置时间不超过24小时。
三、上机操作
1、FSC/SSC画R1门去除碎片及死亡细胞。如图1



图1
2、鉴别Lin1阴性的细胞，在R1门基础上建立一个Lin1/HLA-DR散点图，画R2门，包括Lin1阴性的细胞。如图2

图2
3、鉴别外周血中DC和嗜碱细胞数。在R1和R2上建立CD123/HLA-DR图及CD11c/HLA-DR图，圈R3、R4、R5门，R3门内为嗜碱细胞，R4门内淋系DC细胞，R5门内为髓系DC细胞。如图4、图5



图3 图4

四、DC细胞三色检测试剂
货名	标记	货号	规格	价格￥
lineage cocktail 1	FITC	340546	50T	4200
CD123(Anti---IL-3Rα)	PE	340545	50T	3000
Anti---HLA-DR	PerCP	347364	100T	5760
CD11c	PE	347637	100T	4800
Mouse IgG1	PE	349043	100ug	1860
MouseIgG2a	APC	340473	100ug	8400
总计				28020
3-color dendrtic value bundel	试剂盒	340566	全套	21600
DC细胞四色检测试剂
货名	标记	货号	规格	价格￥
lineage cocktail 1	FITC	340546	50T	4200
CD123(Anti---IL-3Rα)	PE	340545	50T	3000
Anti---HLA-DR	PerCP	347364	100T	5760
Mouse IgG1	PE	349043	100ug	1860
MouseIgG2a	APC	340473	100ug	8400
CD11c	APC	340544	100T	5040
总计				28260
4-color dendrtic value bundel	试剂盒	340565	全套	22500
DC细胞成熟情况检测
CD1a	PE	341651	50T	6480
CD80	PE	340294	50T	3000
CD83	FITC	556910	100T	3420
	PE	556855	100T	4080
CD86	FITC	555657	100T	3420
	PE	555658	100T	4080
	APC	555660	100T	4500