荧光信号增强液 FluoroQuest

荧光信号增强液 FluoroQuest 是美国AAT Bioquest生产的荧光信号增强液，当蛋白质与荧光有机染料偶联时，染料分子的荧光发射通常会降低，有时会降低50-70％。这种猝灭现象已经有数十年的历史了，但是，目前尚没有简单，实用的方法来控制与蛋白质结合的染料的荧光，特别是对于与免疫球蛋白结合的染料的荧光。我们提供此FluoroQuest 荧光信号增强解决方案，该解决方案在细胞成像和流量分析中可将荧光强度提高至2.5倍。这种实验方案提供了一种有效的方法来提高检测免疫学，组织化学和细胞生物学中使用的荧光有机标记的灵敏度。

样品实验方案

1.将细胞接种在滑动室或无菌玻璃盖玻片上，并根据需要处理细胞
2.进行甲醛固定。在室温下用PBS中的3.0–4.0％甲醛孵育细胞10–30分钟。
3.用PBS清洗固定的细胞2–3次。
可选：将PBS中的0.1％Triton X-100加入固定细胞中3至5分钟以增加通透性。用PBS冲洗细胞2-3次。
4.用封闭剂（例如在PBS中的5％BSA）封闭30分钟。
5.按照特定产品的数据表中的建议，在稀释缓冲液中稀释一抗。覆盖足够的稀释抗体以覆盖盖玻片上的细胞或腔室玻片的每个腔室。
6.用PBS清洗2-3次。
7.使用前，在室温下加热FluoroQuest™荧光信号增强溶液。
8.稀释荧光第二抗体在FluoroQuest™荧光信号在室温下增强溶液中，然后染色细胞1小时。对于大多数应用，IgG偶联物的二抗一般范围在0.1-10 µg / mL之间。保持盖玻片覆盖或在潮湿的室内避免蒸发。
9.用PBS洗涤细胞3次。
注意：在此步骤可以用荧光核染色剂或鬼笔环肽进行其他染色。
10.将每个盖玻片倒入带有安装介质的清洁幻灯片上，最好是带有抗褪色防腐剂的幻灯片。如果需要，用透明的抛光剂密封边缘。
11.在显微镜下用正确的滤光片对细胞成像。将幻灯片存放在4°C的黑暗处。