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小管形成实验技术服务

价格：￥300

最新更新日期：2021-07-20 19:21

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南京博恩生物技术有限公司

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产品属性

提供商	博恩生物技术有限公司

服务名称	小管形成实验技术服务

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产品说明

小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的,可量化的方法。内皮细胞结合条件培养基并接种于基底上，易形成三维网状结构。之后通过软件对小管结果进行定量分析。

小管形成实验基本步骤
体外的血管生成实验能很好的模拟tumour的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。我们以HUVEC细胞为例，介绍这一实验的详细过程。

实验方法
（1）实验流程介绍：提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。
（2）耗材结构介绍：Matrigel铺在下孔，细胞铺在Matrigel上，上孔充满培养基。
（3）数据分析流程介绍：在特定的时间点采集图片，并且进行图像分析（Wimasis全自动分析）测量小管长度，成环数，细胞覆盖面积和结点。之后在对测量结果进行统计分析以说明实验结果。

实验步骤
1）准备基质胶
（1）实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4摄氏度冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意：同样要准备一些4摄氏度预冷的枪头用于吸取Matrigel。
（2）开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。
（3）打开灭菌包装，取出ibidi血管生成载玻片。
（4）每孔中加入10μl Matrigel。注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能打入10μl的胶，却不能填满血管生成载玻片的下孔，必然会影响到实验的成像结果。
2）凝胶
（1）盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。
（2）准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。
（3）将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。
（4）将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。
（5）等待同时准备细胞悬液。
3）铺细胞
加入细胞的量直接影响实验结果，所以在正式实验开始之前，要对不同类型的细胞和使用数量进行预实验。获得好的比例的细胞密度。我们今天的实验使用HUVEC细胞，每孔种10000个细胞即可。
（1）准备密度为2*105cells/ml的细胞悬液，充分混匀。
（2）将胶已经凝固的ibidi血管生成载玻片从湿盒中取出。
（3）每孔加入50μl的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶。可以使用排枪。
（4）同样用格子纸查看是不是加了足够量的液体，如果没有，加入无细胞的培养基，使上孔液体正好加满。
（5）盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在Matrigel的表面。
4）采集图像并统计结果
可以按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度，覆盖面积，成环数，结点数进行测量和记录，并且对其进行统计分析。