HUVEC 人脐静脉内皮细胞生物 Homo sapiens，人类组织 脐细胞类型 内皮形态学 鹅卵石外观有大的暗核; 在增殖期间，细胞小且大小均匀，显示高有丝分裂指数并且不显示平滑肌细胞。疾病 正常年龄 新生儿性别 特定批次种族 特定批次应用 药物筛选，血管生成，小管形成，免疫反应，动脉硬化，高血压，血管伤口愈合，炎症，组织重塑，血管分化，氧化应激，细胞凋亡，支架发育产品格式 冷冻1毫升储藏条件 -130°C或更低完全生长培养基 从冰箱中取出一个生长试剂盒; 确保所有组件的盖子都很紧。 在将生长试剂盒的组分添加到基础培养基之前解冻它们的组分。必须在37℃水浴中加热L-谷氨酰胺组分并在加入基础培养基之前摇动以溶解任何沉淀物。从冷藏中获取一瓶血管细胞基础培养基（475mL）。 通过喷洒70％乙醇，对所有生长试剂盒组分小瓶和基础培养基瓶的外表面进行净化。 使用无菌技术，并在层流罩或生物安全柜中工作，如表1或表2所示，将每个生长试剂盒组分的体积转移到基础培养基瓶中，每次转移使用单独的无菌移液管。 表1。如果使用的是内皮细胞生长试剂盒BBE（ATCC ® PCS-100-040），添加指示的卷的每个组件：零件 体积 最终集中牛脑提取物（BBE） 1.0毫升 0.2％rh EGF 0.5毫升 5 ng / mLL-谷氨酰胺 25.0毫升 10毫升硫酸肝素 0.5毫升 0.75单位/ mL氢化可的松半琥珀酸盐 0.5毫升 1μg/ mL胎牛血清 10.0毫升 2％抗坏血酸 0.5毫升 50μg/ mL表2。如果使用的是内皮细胞生长试剂盒VEGF（ATCC ® PCS-100-041），添加指示的卷的每个组件：零件 体积 最终集中rh VEGF 0.5毫升 5 ng / mLrh EGF 0.5毫升 5 ng / mLrh FGF基础 0.5毫升 5 ng / mLrh IGF-1 0.5毫升 15 ng / mLL-谷氨酰胺 25.0毫升 10毫升硫酸肝素 0.5毫升 0.75单位/ mL氢化可的松半琥珀酸盐 0.5毫升 1μg/ mL胎牛血清 10.0毫升 2％抗坏血酸 0.5毫升 50μg/ mL 增殖不需要抗微生物剂和酚红，但如果需要可以加入。表3总结了要添加到完整生长培养基中的任一组分（GA溶液或PSA溶液）的推荐体积。表3。添加抗菌剂/抗真菌药和酚红（可选）零件 体积 最终集中庆大霉素 - 两性霉素B溶液 0.5毫升 庆大霉素：10μg/ mL两性霉素B：0.25μg/ mL青霉素 - 链霉素 - 两性霉素B溶液 0.5毫升 青霉素：10单位/ mL链霉素：10μg/ mL两性霉素B：25ng / mL酚红 0.5毫升 33μM紧紧盖住完整生长培养基瓶并轻轻旋转内容物以确保均匀溶液。不要用力摇晃以避免起泡。标记瓶子和日期。完全生长培养基应在2°C至8°C的黑暗中储存（不要冷冻）。在这些条件下储存时，完整的生长培养基可稳定30天。继代培养 当培养物达到约80％汇合时，传代正常的HUVEC细胞。在解离前将用于原代细胞的胰蛋白酶-EDTA（ATCC PCS-999-003）和胰蛋白酶中和溶液（ATCC PCS-999-004）温热至室温。在与细胞一起使用之前，将温热的完全生长培养基加热至37℃。 对于每个烧瓶，小心地吸出用过的培养基而不打扰单层。用3至5mL D-PBS（ATCC 30-2200）冲洗细胞层两次以除去残留的痕量血清。向每个烧瓶中加入预热的胰蛋白酶-EDTA溶液（每25cm 2 1至2mL ）。轻轻摇动每个烧瓶以确保胰蛋白酶-EDTA溶液完全覆盖细胞，然后从单层吸出多余的液体。在显微镜下观察细胞。当细胞彼此远离并向上翻（通常在3到5分钟内）时，从显微镜上取下烧瓶并从几个侧面轻轻敲打，以促进细胞从烧瓶表面脱离。当大多数细胞似乎已脱离时，快速向每个烧瓶中加入等体积的胰蛋白酶中和溶液（ATCC PCS-999-004）。轻轻移液或旋转培养物，确保所有胰蛋白酶-EDTA溶液均已中和。 将解离的细胞转移到无菌离心管中并放置在一边，同时处理烧瓶中的任何剩余细胞。 向烧瓶中加入3至5 mL D-PBS（ATCC 30-2200）以收集可能遗留下来的任何其他细胞。 将细胞/ D-PBS悬浮液转移到含有胰蛋白酶-EDTA-解离的细胞的离心管中。根据需要重复步骤10和11，直到从烧瓶中收集所有细胞。 将细胞以150×g离心3至5分钟。 从细胞沉淀中吸出中和的解离溶液，并将细胞重悬于2至8mL新鲜的，预热的完全生长培养基中。计数细胞，并在每平方厘米2500至5000个细胞的密度接种新的培养瓶中2。将新接种的烧瓶置于37℃，5％CO 2，培养箱中至少24至48小时，然后进一步处理细胞。有关进纸的指导，请参阅维护。