反相液相色谱法（RPLC或RPC）已使HPLC作为一种色谱技术广为流行。与正常相色谱法相反，RPC需要非极性固定相与极性流动相。流动相通常由水（缓冲液）与、甲醇、THF或2-丙醇混合构成。

硅胶颗粒是最为常用的基质，其与十八烷基硅烷（ODS）起衍生反应。聚合物基质已经成为硅胶基质的替代物，特别是在分析中性或碱性化合物的过程中，具有良好的表现。

RPC柱可用于分析多种化合物，包括中极性、无极性、酸性、碱性、两性化合物等。RPC也是分析衍生氨基酸、缩氨酸和蛋白质的一种方法，但是蛋白质淋洗需要高浓度的有机溶剂，因此会破坏蛋白质结构。


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