豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒
一．实验目的
酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。


二．实验原理
用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。


豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素 （protonhemin）区作辅基。酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。


ELISA的基本原理有三条：
（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；
（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；
（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有


豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒
免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。 ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体，而且也可用于测定体液中的循环抗原，所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大，
可概括四个方面： 
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。 
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。

1）什么是规格？
答：酶免试剂盒的规格有两种，①48T可以测37个样（测得过程中要设10个标准孔，一个空白对照）
②96T单孔可以测85个样复孔45个样（测得过程中要设10个标准孔，一个空白对照）
③10个标准孔是复孔：更好的检验样本最接近的值，避免假阳性。
2）Elisa试剂盒采用的什么原理方法？
答：酶免试剂盒采用的是双抗夹心两步法（三版都是这个方法）
3）用什么仪器来检测？
答：采用酶免仪器来检测，所有酶标仪的标长都是450nm.
4）Elisa试剂盒的灵敏度怎样？
答：酶免的试剂盒灵敏度比较好（有的是ng；有的是moL/L换算和定标相关的可以换算，不相关的就无法换算我们是采用分子关系来换算）
5）试剂盒的保质期多久？
答：通常我们都是发货最近批次的给您，试剂盒的保质期6个月2-8度保存。试剂盒酶标板是可拆的，如果客户没有用完，应装入密封袋中保存。温度2-8度
6）国产和进口分装都有什么区别？
答：看情况，来回答客户，①国产，里面的试剂盒和酶标板是国产的，抗体是采用进口的
②进分，试剂，抗体，标准本都是进口的，只有酶标板是国产的
③原装，所有的都是原装
9）试剂盒的生产厂家是那家公司？
答：国产，我们自己公司生产的，进分品牌有，德国IBL，美国RB，RD，加拿大HCB,德国拜发，原装有，德国IBL，美国RB，RD，客户要求比较高，加拿大HCB,德国拜发价格也比较高
10）为什么要设标准孔和空白对照？测复孔有什么好处？
答：标准孔是复孔：更好的检验样本最接近的值，避免假阳性。测复孔可以取两个结果的平均值，结果更稳定。

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