质粒小提试剂盒（磁珠法）使用说明书 
【概述】 本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统在高盐状态下特异性地结合溶液中的质粒 DNA。使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、 转化、文库筛选、体外翻译、 转染一些常规的传代细胞等。 货 号 名 称 规 格 MBD60908-50 质粒小提试剂盒（磁珠法） 50T 

【适用范围】 适用于提取 1-5 ml过夜培养的大肠杆菌。 

【试剂盒包装及组成】 
试剂盒组成 数量 裂解液 R1 14 mL*1 裂解液 R2 14 mL*1 裂解液 R3 20 mL*1 磁珠 2.5 mL *1 洗脱液 5mL*1 使用说明书 1份 

【注意事项】 1、提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。 
2、磁珠用前一定要充分混匀。 
3、整个裂解过程操作尽量温和，并在要求时间内完成。 
4、结合液异丙醇客户自备。 

【操作步骤】
1. 裂解 取1～5 mL菌液至EP管中，12000 rpm离心2分钟，尽量吸净上清。在菌体沉淀中加入250 μl裂解液R1，吸打或振荡至彻底悬浮 菌体；加入250 μl裂解液R2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀，室温静置2-4 min；加入350 μl裂解液R3，立即温和颠倒离心管 5-10次充分混匀（此时底部会出现大量白色絮状沉淀）。于离心机最大转速（≥ 12,000 × g）离心5-10 min。
2. 结合 尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中，加入等量异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠，颠倒混匀3 min，静置1 min。将EP管置于磁 铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3. 洗涤 加入600 μL 70%乙醇溶液（用户自行配置），轻柔混匀1-2 min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。
4. 洗脱 室温晾干5～10 min至乙醇挥发完全，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃温浴10 min。每隔2～3 min轻摇EP管几下 混匀。然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下步实验。（判断磁珠晾干的标准：侧面观察磁珠无反光，正面观 察磁珠边缘龟裂） 

【低拷贝或大质粒（>10 kb）提取】 如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加裂解 液R1、裂解液R2、裂解液R3、异丙醇、磁珠的用量，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其它步骤相同。