ELISA实验中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。完整的猪内皮素1(ET-1)检测试剂盒应该包含以下各组分:
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液;
(7)酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒,仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
猪内皮素1(ET-1)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
(一)抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度(参考:5ug/ml),加入酶标板(50ul/孔),以胶带封口,于4℃过液。
2.弃抗体液,以双蒸水冲洗3次,自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板,备用。
(二)底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物(参考:5mg/10ml),加入酶标板中(50ul/孔),以胶带封口,37℃避光保存2h,在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
(三)酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本,加至已包被抗体的酶标板中(50ul/ 孔);用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数(参考:40~4000倍),同时加入酶标板中(50ul/ 孔),混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次,然后于吸水纸上拍干,加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min,在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、猪内皮素1(ET-1)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释(预试中确定)加入包被有已知抗原的酶标板中(50ul/孔),加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液,以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体(浓度在预试中确定)。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物(浓度在预试中确定),加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min,其间不时观察,显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值,OPD用492nm测定,TMB用450nm测定。
猪内皮素1(ET-1)检测试剂盒相关产品如下:ybC150Mu 小鼠Ⅵ型胶原α1(COL6α1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Collagen Type VI Alpha 1 (COL6a1)
ybD761Mu 小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glutamine synthetase (GS)
ybB845Mu 小鼠CD83分子(CD83)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 83 (CD83)
ybB448Mu 小鼠信号素7A(SEMA7A)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Semaphorin 7A (SEMA7A)
ybH574Mu 小鼠N-乙酰半乳糖胺酶α(NAGα)ELISA试剂盒 ELISA Kit for N-Acetylgalactosaminidase Alpha (NAGa)
ybB067Mu 小鼠YY肽(PYY)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Peptide YY (PYY)
ybB127Mu 小鼠脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNASE1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Deoxyribonuclease I (DNASE1)
ybB929Mu 小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Choline Acetyltransferase (ChAT)
ybG918Mu 小鼠尿调蛋白(UMOD)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Uromodulin (UMOD)
ybE112Mu 小鼠肝配蛋白B2(EFNB2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Ephrin B2 (EFNB2)
ybB166Mu 小鼠VGF神经生长因子诱导蛋白(VGF)ELISA试剂盒 ELISA Kit for VGF Nerve Growth Factor Inducible (VGF)
ybB267Mu 小鼠激肽原1(KNG1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Kininogen 1 (KNG1)
ybB607Mu 小鼠胸肾表达趋化因子(BRAK)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Breast And Kidney Expressed Chemokine (BRAK)
ybJ026Mu 小鼠谷氨酰胺酶(GLS)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glutaminase (GLS)
ybJ025Mu 小鼠谷氨酰胺酶2(GLS2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Glutaminase 2 (GLS2)
ybD232Mu 小鼠心肌肌钙蛋白T(TNNT2)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Troponin T Type 2, Cardiac (TNNT2)
ybB263Mu 小鼠精氨酸加压素受体1B(AVPR1B)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Arginine Vasopressin Receptor 1B (AVPR1B)
ybL643Mu 小鼠EGF样域蛋白7(EGFL7)ELISA试剂盒 ELISA Kit for EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)
ybG962Mu 小鼠翻译调节肿瘤蛋白1(TPT1)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Tumor Protein, Translationally Controlled 1 (TPT1)
ybB890Mu 小鼠载脂蛋白C3(APOC3)ELISA试剂盒 ELISA Kit for Apolipoprotein C3 (APOC3)