技术简介
慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

实验步骤

（1）慢病毒包装细胞转染用胰蛋白酶消化对数生长期的293T细胞，细胞密度为0.5×10时；重新接种于25mL的15cm细胞培养皿，37℃，50mL/LCO2培养箱内培养；

（2）制备慢病毒包装系统中四种质粒DNA溶液；

（3）当细胞密度达60%～70%时转染。将DNA和磷酸钙混合液转移至含单层细胞的培养液中，混匀，培养12h后弃去含有转染混和物的培养液，加入PBS15mL，轻摇后弃去，重复该步骤3次；

（4）每瓶细胞中加入含100mL/L小牛血清的细胞培养液15mL，继续培养48h；

（5）收集转染72h的293T细胞上清液；

（6）将收集的上清液于4℃，4000 g离心10 min，收集上清液；

（7）将各种不同RNA干扰质粒上清液以0.45 μm滤器过滤；

（8）于40mL超速离心管中，4℃，25000 r/min离心20min；

（9）而后以冰PBS液，分别溶于500 ul DMEM，和500 ul PBS重旋病毒沉淀于4℃溶解过夜。