REAGEN™Beta-内酰胺类药物ELISA测试盒
RND99027
1．概述
REAGEN™Beta-内酰胺类药物酶联免疫反应测试盒是用于牛奶、尿液、组织(肝脏、肾脏和肌肉)、血清和血浆样本中青霉素族包括氨苄青霉素、青霉素 G、羟氨苄青霉素、氯唑西林(邻氯青霉素)、苯甲异恶唑青霉素等药物残留的定量检测。该试剂盒有以下特点：

• 高回收率(75-105%)，低成本快速的样品处理过程。
• 高灵敏度（0.04ng/g=0.04ppb）。
• 高重复性(板间和板内CV<8%)。
• 检测过程只需要不到2小时。

2．试剂盒原理
REAGEN™Beta-内酰胺类药物酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，微孔板上包被着beta-内酰胺类药物抗原。分析时，样品同beta-内酰胺捕获蛋白一起混合加入孔中，如果样品中含有beta-内酰胺类药物，会竞争捕获蛋白，因而抑制板上包被的药物抗原与捕获蛋白结合。HRP标记的二抗，与结合在板上捕获蛋白相结合后，加入TMB底物，底物的颜色显色强度与样品中毒素的含量成反比。样品中Beta-内酰胺类药物的残留水平通过试剂盒中提供的标准品确定的标准曲线进行测定。
3.试剂盒组成
酶标板(Beta-Lactam Coated Plate)（可拆式） 12×8 孔
标准液空管（0，0.08，0.2，0.4，0.8，1.2 ng/ml） 6×1瓶
青霉素G粉末1000ng(Penicillin G powder stock (1000 ng)……2×1000ng
10×Beta-内酰胺捕获蛋白(10X Beta-Lactam Capture Protein) 1×1.8mL
牛奶标准品稀释液1(Milk Standard Dilution Buffer 1) 1×12mL
200×HRP偶联二抗(200X HRP-Conjugated Antibody #2) 1×100 mL
二抗稀释液(Antibody #2 Diluent) 1×20mL
10×Beta-内酰胺提取液(10X Beta-Lactam Extraction Buffer) 2×28mL
20×浓缩洗液(Wash Solution) 1×30mL


终止液(Stop Buffer) 1×20mL
TMB底物(TMB Substrate) 1×10mL
本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。如果超过1个月不使用试剂盒，请将青霉素G粉末、10×Beta-内酰胺捕获蛋白、牛奶标准品稀释液1、200×HRP-二抗放置-20℃或者冰冻保存。
4. 检测限

抗生素	牛奶,肉, 组织, 鱼和尿液 (ppb)	血清和血浆 (ppb)
青霉素G(Penicillin G)	0.40	0.80
氨苄青霉素(Ampicillin)	0.43	0.86
阿洛西林(Azlocillin)	0.40	0.80
哌拉西林(Pipercillin)	0.52	1.04
乙氧萘(胺)青霉素(Nafcillin) 新青霉素III，萘夫西林	0.58	1.16
羟氨苄青霉素(Amoxicillin)	0.62	1.24
邻氯青霉素(Cloxacillin)	0.64	1.28
苯甲异恶唑青霉(Oxacillin)	0.64	1.28
头孢氧哌唑(Cefoperazone)	0.67	1.34
头孢噻夫(Ceftiofur)	0.7	1.4

5.交叉反应

交叉反应物质	交叉反应（%）
青霉素G(Penicillin G)	100
氨苄青霉素(Ampicillin)	92
阿洛西林(Azlocillin)	112
哌拉西林(Pipercillin)	70
乙氧萘(胺)青霉素(Nafcillin) 新青霉素III，萘夫西林	55
羟氨苄青霉素(Amoxicillin)	44
邻氯青霉素(Cloxacillin)	40
苯甲异恶唑青霉(Oxacillin)	40
头孢氧哌唑(Cefoperazone)	34
头孢噻夫(Ceftiofur)	25

6．未提供的设备或材料

• 酶标仪(450 nm)
• 恒温培养箱(如果室温超出20 – 25°C / 68 – 77°F范围)
• 离心机
• 漩涡振荡器
• 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)
• 多道移液器（50-300mL）
• 双蒸馏水
• 匀质器
• 一次清PE手套

10) 纸巾
11) 正己烷
7.注意事项
实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

• 标准品中含有青霉素G，请小心使用。
• 不要使用过期的试剂盒。
• 不同批次的试剂盒不要混用，捕获蛋白和微孔板具有盒与批次的特异性。确保二抗和二抗稀释液的正确配制。
• 尽量保持室温20-25℃，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。
• 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。
• 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。当加入Beta-内酰胺捕获蛋白的时候在孔德顶部边缘避免孔和孔间的污染。

• 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。
• 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。
• 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。

8．试剂的准备
所有的试剂在使用之前应将其在室温下回温1-2小时，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度。确保样品的合理保存，通常样品保存于2-4℃并且不超过1-2天；如果样品需要保存更长的时间，请于-20℃冰冻保存；冻结的样品可在室温（20-25℃）或者普通冷藏以解融。
（1）1×Beta-内酰胺提取液
按1：9的比例用蒸馏水稀释10×Beta-内酰胺提取液(10X Beta-Lactam Extraction Buffer)。举例：取2ml的10×Beta-内酰胺提取液(10X Beta-Lactam Extraction Buffer)加入到18ml双蒸馏水中，配制成20ml的1×beta-内酰胺提取液(1X Beta-Lactam Extraction Buffer)，按需要，可同比例放大或缩小。

9．样品的准备
1） 肉/鱼/组织

• 使用合适的匀浆器进行匀质样品成糊状；
• 取1g匀质样品，加入9mL1×Beta-内酰胺提取液，涡旋振荡3分钟或用摇床振摇20分钟；
• 室温（22.5±2.5）°C下转速4000rpm离心10分钟；
• 移取1mL的上清液，加入2mL正己烷，涡旋振荡2分钟；
• 室温（22.5±2.5）°C下转速4000rpm离心10分钟；
• 去除上层正己烷每孔取50mL下清夜样品进行检测。确保去除正己烷完全。

稀释倍数：10.0
注：如果Beta-内酰胺药物浓度过高，样品可以用1×Beta-内酰胺提取液进一步稀释。