Lonto® ELISA
仅供科研使用，不得用于临床诊断人促黄体生成素（LH）定量检测试剂盒（ELISA）货号：XX-001
定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液中促黄体生成素（LH）的浓度。
使用试剂盒前，必须仔细阅读本说明书。
中国 | 泉州市蓝图生物科技有限公司
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简介促黄体生成素luteotropic hormone，LH。由垂体产生的一种激素。在男性中能刺激睾丸间质细胞分泌男性激素，在女性中刺激卵巢分泌女性雌激素。
促黄体生成素（LH）由腺垂体嗜碱粒细胞分泌。在女性（LH）协同FSH共同作用维持卵巢的月经周期，导致排卵与黄体形成。LH的产生受下丘脑促性腺释放激素的控制，同时受卵巢的正、负反馈调控。LH与FSH联合检测，在女性主要鉴别原发性（卵巢性）或继发性（垂体性）闭经；在男性用于鉴别原发性或继发性睾丸功能低下；同时可鉴别青春期前儿童真性或假性早熟。
在月经周期LH的释放高峰与卵巢排卵有着密切关系，LH高峰一经出现，预示24-36小时卵巢排卵，因此可以在月经周期中监测血清LH峰值，以确定最佳受孕时间。该检测结果以毫国际单位/毫升（MIU/ML）表示。
LH水平增高临床意义：
*多囊卵巢综合征（持续无排卵及雄性激素过多等）、TUYN-ER综合征、原发性性腺功能低下、卵巢功能早衰、卵巢切除术后；
*更年期综合征或绝经期妇女。
LH水平降低临床意义：
* 下丘脑-垂体促性腺功能不足，如下丘脑性闭经；
* 长期服用避孕药；
* 使用激素替代治疗后，LH和FSH可下降。
实验原理本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人促黄体生成素（LH）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人促黄体生成素（LH）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人促黄体生成素（LH）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中促黄体生成素（LH）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中促黄体生成素（LH）的浓度。
试剂盒限制性1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排出该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
技术提示1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、使用自动洗板机时，加入一个30秒浸泡的步骤，可以提高检测精度。
5、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
7、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
8、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
试剂盒组分与保存未开封的试剂盒保存在2-8度，不得使用过期试剂盒。
| 组分 | 数量 | 主要成分 | 开封后储存 |
| 校准品 | 0.5ml/管 | ****** | 2-8℃1天 |
| 包被微孔板 | 96T | 预包被固相抗原 | 2-8℃14天 |
| HRP标记抗体 | 6mL | HRP标记的检测抗体 | 2-8℃180天 |
| 底物液A | 6mL | 0.01%过氧化氢 | 2-8℃180天 |
| 底物液B | 6mL | 0.1%鲁米诺 | 2-8℃180天 |
| 30×浓缩洗涤液 | 20mL | 0.05%Tween20 | 2-8℃180天 |
| 说明书 | 1份 | -- | -- |
| 自封袋 | 1个 | -- | -- |
| 不干胶 | 2片 | -- | -- |
其他用品1、酶标仪
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择）
生物安全1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
4、戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。
样品的采集和储存以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、
细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、
血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、
血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。
试剂准备1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:30稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加29份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。
操作程序所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
4、样本孔加待测样本50μL。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体50μL。
6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育120min。
7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
8、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。
9、所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。
结果计算以标准品浓度做为纵坐标，对应的吸光度（OD值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的吸光度（OD值），利用方程计算样品的浓度值。
如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。
试剂盒性能指标1、物理性能试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、剂量反应曲线线性校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
3、精密度批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。
4、灵敏度最低检出剂量小于******。
5、回收率三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在85%-115%之间。
6、样本值1524例健康志愿者血清和血浆样品进行测定，所有的样品测量小于****。
7、特异性本试剂盒识别天然和重组促黄体生成素（LH），与结构类似物无交叉。
8、稳定性 2℃-8℃保存，有效期6个月。
