革兰氏染色液使用说明书
有效期：1 年。
产品说明：
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了 不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌细胞壁较厚，肽聚糖网层次较多且交联致密，乙醇脱色时， 肽聚糖脱水使孔径缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。革兰氏阴性菌细胞壁薄、外膜层类脂含 量高、肽聚糖层薄且交联度差，脱色后类脂外膜迅速溶解，缝隙加大，结晶紫与碘复合物溶出，因此乙醇脱 色后再经番红复染，呈红色。
操作步骤：
1. 涂片固定
菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。固定时通过火焰 1-2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2. 染色
一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
（1）加上结晶紫后，染色 1 分钟，水洗。
（2）加上碘液后染色 1 分钟，水洗。
（3）加上 95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约 20-60 秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色 1 分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴 性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌体自行溶解， 都常呈阴性反应。
3. 结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密 集的细菌，常常呈现假阳性。
注意事项：
1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
2．玻片通过火焰温度不能太高。
3．碘液变透明，则不能使用。
4．水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。





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