小鼠快速基因型鉴定试剂盒本试剂盒专为小鼠快速基因型鉴定（Genotyping）而研制。试剂盒中包含的高效组织消化液（Protease S）能够迅速从小鼠尾巴、耳朵或脚趾等组织中释放足量的基因组DNA，并且无需对其进行抽提与纯化，可直接将消化产物作为模板加入2 x PCR Master Mix中进行PCR扩增，PCR扩增产物（含有染料）可直接点样进行电泳观察。实验操作简便而省时。
应用范围
小鼠基因型鉴定（尾巴、耳朵或脚趾）
小鼠基因组DNA扩增、测序
| (100 rxns) | (200 rxns) | (500 rxns) |
| Buffer A (mL) | 10 | 20 | 50 |
| Buffer B (ul) | 30 | 60 | 150 |
| 2 xPCR master Mix (mL) | 1 | 2 | 5 |
储存条件
Buffer A 4℃保存，其余组分-20℃保存。保质期一年。
操作步骤
1. 组织消化1.1. 按小鼠数量配制组织消化液，试剂比例如下：
（单样本）
| （单样本） |
| Buffer A | 100 μL |
| Buffer B | 0.3 μL |
1.2 小鼠组织完全浸没于消化液中
56℃，15-30分钟；
95℃， 5分钟
,
2. PCR扩增2.1. PCR反应体系：
反应体系的配制最好于低温环境下（如冰浴）完成，以保证PCR扩增效率和扩增特异性。
| PCR 反应组分 | 20 μL 反应体系 (μL) | 50 μL 反应体系 (μL) |
| ddH2O | 7 | 18 |
| 正向引物 (10 μM) | 0.5 | 1 |
| 反向引物 (10 μM) | 0.5 | 1 |
| 模板（消化产物） | 2 | 5 |
| 2 x PCR master Mix | 10 | 25 |
2.2. PCR反应条件：
| 温度 (℃) | 时间 | 循环数 |
| 94 | 5 min | 1 |
| 94 | 20 sec | 30-40 |
| 50-65 | 30 sec |
| 72 | X min (2kb/min) |
| 72 | 5 min | 1 |
| 12 | -- | 1 |
PCR产物的3’端带有碱基A，可直接克隆至T载体，用于DNA测序。
3. 琼脂糖凝胶电泳试剂2 x PCR Master Mix中含有溴酚蓝染料，PCR产物可直接点样进行琼脂糖凝胶电泳。
常见问题与对策
| 常见问题 | 可能原因 | 对策 |
| 样本组与阳性对照组均无扩增条带 | PCR反应条件设置不当 | 优化PCR反应条件 |
| PCR引物质量问题 | 重新设计PCR引物 |
| 样本组无扩增条带而阳性对照组正常 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失 | 使用新鲜的试剂 |
| 组织消化不够充分 | 延长56℃消化时间至1-3小时 |
| 蛋白酶未被完全灭活 | 消化产物在95-100℃孵育5 min |
| 存在非特异性扩增条带 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度 |
| PCR引物错配 | 重新设计PCR引物 |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应 |
效果示意图
