本公司开 的PCR 检测试剂盒,它具有下列特点: 1.即开即用,用户只需要提供病毒 DNA 模板。 2.引物经过优化,灵敏性比使用世界动物卫生组织推荐的引物高100 倍以上。 3.特异性高,引物是根据保守的 vp72 基因设计。 4.提供阳性对照,便于分析实验结果。 5.PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 本试剂盒足够做 40μL 体系的PCR 50 次,只能用于科研。使用方法 一、样品 DNA 的制备 1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒DNAout。 2.如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个阳性对照和一个阴性对照。阳性对照是在 200μL 水中加 10μL PCR 阳性对照作为阳性对照,阴性对照是直接用 200μL 水作为阴性对照。提取结束后,最后得到 200μL 模板 DNA(每个样品)放冰上待用,溶解 DNA 沉淀的溶液 不能少于 200μL,否则PCR 抑制物很可能会抑制 PCR。二、PCR(60 μL 体系) 3.样品管:在 N+2 个PCR 管中加入下列成分: 成分 N 个样品管 阴性对照 阳性对照 PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL 非洲猪瘟PCR 引物对 各 2 μL 2 μL 2 μL 样品 DNA 模板 各 18 μL - - 阳性对照(纯化后) - 18 μL - 阴性对照(纯化后) - - 18 μL 电泳检测 5.取 10-20 μL PCR 产物直接进行琼脂糖凝胶电泳(本产品不需要单独加loading buffer),最好使用 100 bp DNA Marker,如果样品为阳性,将会得到长度为 3122 bp 的扩增产物。