凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）

简介

凝胶迁移或实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是或者是单链。当检测 如转录调控一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异）， 和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）。