【实验原理】钙离子在细胞的生理活动中起着重要的作用，游离钙离子浓度的变化与细胞的功能、信号的传递及其损伤和凋亡都有着密切的联系。钙离子是单个细胞生存和死亡的信号，并调控它的种种功能。钙流检测是药物研发中c蛋白偶联受体(GPCR)筛选的首xuan方法，同时，胞内钙离子浓度的变化也是细胞凋亡研究的手段之一。因此，钙离子荧光染料被广泛使用，它们具有细胞透性，因此可以染活细胞。它们与钙离子结合后荧光强度大大提高，可用于流式细胞术、免疫荧光和荧光色谱分析。
【实验流程】1.消化细胞，离心2次。
2.加入PBS重悬，调整细胞密度为1×106/ml。
3.加入Fura-2/AM，使其终浓度为5μmol/L，置入37℃水浴箱中，避光孵育30～45min。
4.离心2次。
5.加入HBSS溶液(含CaCl
2，1.5mmol/L)悬浮细胞，调整细胞密度为1×10
6/ml，37℃，30min(酯化探针充分水解)，避光。
6.提前20min开机，恒温测钙水浴箱保持37℃。7使用荧光分光光度计进行检测，激发波长为340nm和380 nm的激发光交替扫描，检测发射波长为510 nm的发射光的荧光强度。先分别测定340nm和380 nm激发光所产生的发射光荧光强度，再加入终浓度为0.1%的Triton X-100进行测定，最后加入5 mmol/L EGTA进行测定。
【易科生物】——您身边的科研助手，让科研变得容易！ 北京易科攀搏生物科技有限公司，于2013年注册，由海归的生物学博士与国内优秀生物学、医学博士学位获得者联合成立,招聘了诸多留学人员与国内优秀博士作为专兼职编辑，以及优秀的实验技术人员。目前,公司拥有技术实验人员及专兼职编辑60余人,分布在分子生物学、细胞生物学、动物建模、基础医学、临床研究等各个领域。公司目前已经有500余项目成功案例；300余国家、省市课题设计经验；200余基础课题协助完成；80余全国三甲医院、医药企业合作。公司实验室平台占地10000平米，有独立的分子实验、细胞实验、动物实验平台，有承接绝大部分实验的能力。
【联系方式】
联系电话：010-53689310，400-878-9491
公司网址：www.easy-to-lab.com
业务邮箱：sci@scieasypub.com
QQ：103626816 
