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SY0022型pUM19-T Vector TA克隆载体库存的品牌:百奥莱博,是优质的克隆与表达产品,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多pUM19-T Vector TA克隆载体等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。
名称:SY0022型pUM19-T Vector TA克隆载体库存
品牌:百奥莱博
编号:SY0022
产地:国产|进口
规格:5μg
pUM19-T载体是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上,在两侧的3’端添加碱基T而制成。特殊的纯化方式使得超过99%的pUM19载体两端都具有3’-T突出端,因此极大的降低了载体自连率。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A,可与pUM19载体3’端的T互补连接,因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内,可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。连接使用的PCR 片段3’端应带有A 末端;Pfu DNA Polymerase等高保真聚合酶的扩增产物不带A,应先在其末端加A后再进行TA克隆。本品随载体提供对照片段(500bp)用于阳性对照反应。
1.将载体置于冰上融化。建议第一次使用时将载体分装成小份保存,每次取一支使用。
2.按下表配置连接反应体系
ddH2O——To 10 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1μl (约0.025 pmol)
插入片段*——0.075 pmol~0.25 pmol
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
注:插入片段与载体的摩尔比应在3:1~10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度,并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3.对照反应体系(可选):
ddH2O——6 μl
10×Ligase Buffer——1 μl
pUM19-T Vector (50 ng/μl)——1 μl (约0.025 pmol)
500 bp control insert(50 ng/μl)——1 μl (约0.15 pmol)
T4 DNA Ligase (400 U/μl)——1 μl
4.轻轻吹打混匀反应体系,室温22-26℃孵育1-2小时,或16℃过夜。
5.转化:
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6),轻轻弹匀,冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴,不要晃动,准确热激90秒后,立刻置于冰水浴中,不要晃动,静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基,150 rpm, 37℃振荡培养45分钟,使菌体复苏,抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟,去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀,用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀,室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后,37℃倒置培养过夜。
注:如果使用超级感受态细胞(转化效率>108 cfu/μg),可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存,一周之内都可重新涂板。
储存条件:-20℃。
注意事项
1) 尽量避免反复冻融,可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
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SJ0245 Doxycycline-HCL 盐*(代"酸")强力霉素
SY0022型pUM19-T Vector TA克隆载体库存关键词:pUM19-T Vector TA克隆载体,百奥莱博,SY0022
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·STAT3-GFP报告基因质粒
编号:SY0155
英文名称:STAT3 GFP Reporter Plasmid
规格:1μg
STAT3报告基因是用于检测STAT3二聚体和STAT1/STAT3异质二聚体的转录活性水平为目的的报告基因。激活STAT3后形成STAT3二聚体和STAT1/STAT3异质二聚体,它们与SIS-inducible element(SIE)反应元件进行相互作用调控细胞的生长和凋亡。STAT3(signal transducers and activators of transduction-3)报告基因与多种恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移关系密切。
STAT3报告基因主要用于监控细胞STAT3信号通路中的STAT3转录活性、肿瘤治疗药物的研发以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMSTAT3-GFP是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个STAT3结合位点,可以高效地检测STAT3的激活水平。由于载体采用了GFP作为报告基因,更便于后续的检测。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。另外,由于质粒体积减小,使得STAT3-GFP报告基因更易于转染。
质粒图谱

pGMSTAT3 -GFP质粒测序引物
5’-TAGCAAAATAGGCTGTCCC-3’
使用说明
pGMSTAT3-GFP可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。
注意事项
1)本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
储存条件:-20℃。
·pGM-CMV-Luc荧光素酶报告基因质粒阳性对照
编号:SY0114
英文名称:pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid Positive Control
规格:1μg
pGM-CMV-Luc是以CMV作为启动子,启动Luciferase在细胞内的表达,主要用于萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)报告基因的阳性对照和动物的活体成像实验等。通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理,在不改变质粒功能的情况下,使质粒对转录因子的非特异结合降到了最低。
质粒图谱

使用说明
pGM-CMV-Luc可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
注意事项
1) 本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
2) 为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
质粒元件信息:
| CMV promoter | 32-634 |
| Minimal TA promoter (pTA) | 663-685 |
| Luciferase reporter gene | 717-2379 |
| SV40 late poly(A) signal | 2414-2635 |
| SV40 early promoter | 2683-3101 |
| Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor) coding region | 3126-3920 |
| Synthetic poly(A) signal | 3945-3993 |
| Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region | 5108-5968 |
| Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site | 6073-6226 |
储存条件:-20℃。
SY0022型pUM19-T Vector TA克隆载体库存关键词:pUM19-T Vector TA克隆载体,百奥莱博,SY0022
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·辣根过氧化物酶标记链霉亲和素
编号:SY0746
英文名称:Peroxidase-conjugated Streptavidin
规格:100μl
本品是辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素,以液体形式提供,含50%甘油。建议工作液浓度:0.01-0.1µg/ml for WB(化学发光法);1-2µg/ml for ELISA,IHC/ICC,WB(底物显色法)。
链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌(streptomyces avidinii)的生物素结合蛋白,其非特异性结合远比亲和素低,且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比,链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷,不含有碳水化合物等更有利的化学性质,所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。
链霉亲和素浓度:0.5 mg/ml
缓冲液:0.005M 磷酸*,0.125M *化*, pH 7.6
稳定剂:7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶)
防腐剂:None(叠氮化*会抑制辣根过氧化物酶的活性)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
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