Annexin V染色

一．试剂组成
1．结合缓冲液4*(Binding Buffer 4*)
体积：20马力（4倍浓缩液）
稀释后溶液中各组分浓度：10mM Hepes/NaOH,pH7.4,140mM NaCL,2.5mM CaCL2
2．碘化丙锭溶液（Propidium Iodide）
体积：1.0ml
浓度：20ug/ml
3．重组人Annexin V/FITC,(rh Annexin V/FITC)
来源：大肠杆菌（E.coli）
分子量：35.8KDa
样品量：0.5ml,可用于100次实验
保存方法：于50mM TRIS,100mM NaCL,1%BSA,0.02%NaN3,pH7.4,溶液中保存
纯度：SDS-PAGE及反相HPLC表明纯度大于98%
生物活性：Annexin V可用结合于磷脂酰丝氨酸并表现出抗磷脂酶活性

二．检测
标记的Annexin V可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷脂酰丝氨酸，操作流程如下：
1．用去离子水按1：4稀释结合缓冲液（20毫升结合缓冲液+60毫升去离子水）
2．用4℃预冷PBS洗细胞两次，用250微升结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为1*10⁶/ml
3．取100ul的细胞悬液于5毫升流式管中，加入5ul Annexin V/FITC10ul 和20ug/ml的碘化丙锭溶液。
4．混匀后于室温避光孵育15分钟
5．在反应管中加400ul PBS 流式细胞仪（FACS）分析