实验步骤：

1. 蛋白提取 根据标本类型及检测蛋白类型，选择对应的提取试剂。标本类型主要分为组织标本、细胞标本等。蛋白类型分为：胞膜蛋白、胞浆蛋白、胞核蛋白，磷酸化蛋白、非磷酸化蛋白等。
2. 蛋白浓度测定及变性 一般使用BCA或bradford法测定总蛋白浓度。浓度测定完成后，加入上样缓冲液，沸水浴5分钟，将蛋白分装保存。
3. 制胶 根据检测的蛋白分子量的大小，确定所需SDS胶的浓度，进行配制。
4. 上样  将变性后的蛋白加入上样孔中，需要确保所有标本的总蛋白量一致。
5. 电泳
6. 转膜 根据蛋白MARKER分离的情况，确定所需蛋白的位置。将胶从玻板上取下，做成三明治夹层进行转移。
7. 封闭 转膜完成后，将膜取出。用脱脂奶粉或BSA等封闭液封闭，浓度一般为3%-5%。封闭时间可以选择4℃过夜或室温1小时等。
8. 孵一抗 将一抗稀释至适当浓度，与膜充分结合。孵育时间可以选择4℃过夜或室温2小时、37℃1小时等。
9. 洗脱 孵育完成后，用TBST（PH 7.2-7.4）洗脱未结合抗体。5分钟3次。
10. 孵二抗 加入稀释好的、与一抗对应的、HRP标记的二抗，孵育时间一般为室温1小时。
11. 洗脱 孵育完成后，用TBST（PH 7.2-7.4）洗脱未结合的二抗。
12. 显色曝光 配制ECL使用液，滴加到洗脱好的膜上，于暗室中用胶片感光。用显影定影试剂盒进
13. 进行显影、定影。将定影后的胶片晾干、扫描、存档。

 结果提供：

• 详细的实验步骤
• 蛋白定量结果
• 目的蛋白检测图片
• 内参检测图片
• 灰度分析结果
• 预实验结果

服务时间：

接到样品10个工作日内

 欢迎来电来函详谈，量大者从优