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- 上海钦诚生物科技有限公司
- Paracoccidioides brasiliensis巴西副球孢子菌PCR试剂盒
¥1690
钦诚生物
2021-08-06 15:32
我要认领上海钦诚生物科技有限公司
余经理
shqcsw01@163.com
产品属性
产品说明
产品及特点- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 荧光定量 PCR 检测，反应特异性强。
- 提供阳性对照，便于分析实验结果。
4.PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。规格及成分| 成分 | 编号 | 50 次塑料袋包装 |
| 2×qPCR Mix | 90408 | 1.0 mL |
| stn 专一性引物对 | yw13891390 | 200 μL |
stn 阳性对照，
XXX10E9拷贝/μL |
yw13911392 |
100 μL |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限一年。使用方法一、样品 DNA 的制备用自选方法提取细菌样品 DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。二、制备 stn 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
- 用带芯枪头分别加入45μL超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到
10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。- 在6号管中加入5μL10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
- 换枪头，从6号管中取5μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5 拷贝/μL的阳性对照。
- 换枪头，从5号管中取5μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6 个稀释度的阳性对照。
- NC 管中不加任何阳性对照。
- 从1-6号管中分别取5μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCRCt值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
- 在PCR管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）
注:仅 ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR 仪器（如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene6000和LightCycler480）不需要使用ROX。- 建议PCR 反应参数（具体PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化）
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 93℃ | 5 min |
PCR 反应
（40 个循环） | 93℃ | 35 s |
| 55℃ | 45 s |
3.数据采集按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm， 最大发射光谱在 530 nm。四、数据处理以stn 阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的log为横轴，以Ct值为纵轴，通过待测样品的Ct值计算出样品DNA 的浓度。 
