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CCK-8 细胞增殖与毒性检测试剂盒

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2021-08-10 11:43
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上海锐赛生物技术有限公司

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上海锐赛生物技术有限公司
肖老师
13761475994 021-64197338
service@research-bio.com
2511248438
产品属性
服务名称细胞功能实验服务
提供商锐赛生物
产品说明
CCK-8细胞增殖与毒性检测试剂盒
Cell Counting Kit-8 User Manual

产品简介:
1、CCK-8试剂盒，是 种基于WST-8的 泛应 于细胞增殖和细胞毒性的快速 灵敏度检测试剂盒。
2、WST-8是 种类似于MTT的化合物，在电 耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被还原 成橙黄 溶性的甲臜(Formazan)(图1)。细胞增殖越多越快，则颜 越深;细胞毒性越 ，则颜 越浅。对于同样的细胞，颜 的深浅和细胞数 呈线性关系。



图1.WST-8分 结构式及其检测原理



产品优势:

本试剂盒提供了 种灵敏度 、操作简便、使 安全的细胞增殖与毒性检测 法。与传统的MTT实验相 具有明显的优势:
1、CCK-8法是 于细胞因 等诱导的细胞增殖检测，也可以 于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或 些药物诱导的细胞 长抑制检测等与细胞活性和增殖相关的实验的 种 灵敏度， 放射性的 检测法。
2、CCK-8法对细胞 毒性，可多次测定选取最佳测定时间，与MTT 法相 线性范围更宽，灵敏度 。
3、CCK-8溶液不需配制，可以直接加 到细胞样品中，即开即 ， MTT更加稳定，实验结果重复性好，适合 规模， 通量的样品检测。
4、MTT实验 成的formazan不是 溶性的，需要使 DMSO等有机溶剂溶解; 本 法产 的formazan是 溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此 减少了该操作步骤带来的误差。


产品包装:
产品货号规格数量
D002-150次0.5ml×1管
D002-2500次1ml×5管
D002-310000次25ml×4瓶



贮藏条件:
CCK-8溶液在避光、0-5°C的条件下可以保存1年，若长期不 可在-20°C下避光保存2年。建议分装后保存于-20°C，使 时提前于4°C解冻，请避免反复冻融，否则增加背景值， 扰实验结果。


所需的设备及耗材:
1. 10ul、100-200ul以及多通道移液器
2. 酶标仪(带有450nm滤光 )
3. 96孔培养板
4. CO2培养箱


使用方法:
1、在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞，具体每孔所 的细胞的数 ，需根据细胞的 ，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
2、按照实验需要，进 培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理 段适当的时间(例如:6,12,24或48 时)。
3、每孔加 10ulCCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加 20ulCCK-8溶液，以此类推。可以 加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空 对照，若担 所使 的药物会 扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空 对照。
4、在细胞培养箱内继续孵育1-4 时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4 时后分别 酶标仪检测，然后选取吸光度范围 较适宜的 个时间点 于后续实验。
5、酶标仪测定在450nm处的吸光值，若 450nm滤光 ，可以使 420-480nm的滤光 。如果样品为 浑浊度的细胞悬液，可以使 于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进 双波长测定。
6、如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加 10ul0.1MHCl溶液或者1%w/v的SDS溶液，避光保存在室温，24 时内吸光度不会发 变化。


注意事项:
1、使 96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围 圈加培养基、 或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近 盘的位置以缓解蒸发。
2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少 不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加CCK-8试剂后的培养时间。
3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防 因细胞沉淀造成不均匀。加 CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响 较 的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加 药物后的空 吸收即可。
5、加 CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换新鲜的培养基。
6、酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免污染。
8、为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳手套操作。


参考文献:
  1. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. Mosmann T (1983).Journal of Immunological Methods. 65: 55–63.
  2. A highly water-soluble disulfonated tetrazolium salt as a chromogenic indicator for NADH as well as cell viability, Talanta 44,1299-1305, 1997.
  3. A Vital Role for Ape1/Ref1 Protein in Repairing Spontaneous DNA Damage in Human Cells, Molecular Cell, 17, 463-470, 2005.
  4. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Life Science Journal. Vol.5,No.2, 2008.






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