Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒规格价格,详情介绍-960化工网

Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒规格

价格：¥800 - 3800

品牌：研生

产地：进口

最新更新日期：2021-08-10 11:44

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上海研生实业有限公司

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产品属性

数量

英文名	Calcein-AM/PI Double Stain Kit

CAS号

详见说明书

保质期

详见说明书

供应商

上海研生

保存条件

低温冷藏

规格

500T

产品说明

实验报告：
一、Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒规格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

中文名称：Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒规格
英文名称：Calcein-AM/PI Double Stain Kit
产品规格：500T
发货周期：1～3天
Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm,Em=515nm）。因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein,AM细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidiumiodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535nm,Em=617nm），因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545nm激发，仅可观察到死细胞。
本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，单次就200μl细胞悬液进行染色。
注意事项
1）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
2）碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。
3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存条件-20℃，有效期12个月
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
1--1h-咪唑-4-酰移器P200/单道大龙移器P200
1-(四-2H-喃-4-)移器P100/单道大龙移器P100
1-异嗪移器P50/单道大龙移器P50
2--5-氧移器P20/单道大龙移器P20
3-氧-4-单道移器P10//单道大龙移器P10
4-溴-1H-唑-3-移器P2.5/单道大龙移器P2.5
4--3-微量可调八道移器P300
1-苄-2-咪唑微量可调八道移器P50
4,5-二嘧啶优质铝箔纸/Pure aluminium-foil paper
5,7-二羟-2,2-二-4H-1,3-并二氧-4-透析用玻璃纸/Dialysis glassine paper
Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒规格标准品 Sodium Tartrate Dihydrate CAS6106247
硬脂富马标准品 Sodium Stearyl Fumarate CAS4070808
羧淀标准品（B型） Sodium Starch Glycolate Type B CAS9063381
羧淀标准品（A型） Sodium Starch Glycolate Type A CAS9063381
水杨标准品 Sodium Salicylate CAS54217
标准品 Sodium Propionate CAS6700170
普标准品 Sodium Nitroprusside CAS13755389
标准品 Sodium Lactate CAS867561
二四铁标准品 Sodium Iron EDTA CAS15708415
柠檬标准品 Sodium Citrate (AS) CAS1545801
标准品 Sodium Chloride (AS) CAS7647145
标准品 Sodium Butyrate CAS156547
标准品 Sodium Bromide CAS7647156
碳标准品 Sodium Bicarbonate (AS) CAS144558
标准品 Sodium Benzoate CAS532321
钨二水合物进口、国产 Sodiumtungstatedihydrate 含量CP，97%
钨银进口、国产 Silvertungstate 含量CP
无机焦酶进口、国产 InorganicPyrophosphatase 含量BR，1500u/mg
无色结晶紫进口、国产 LCV 含量ACS
无色孔雀石绿进口、国产 LeucomalachiteGreen 含量BS
无水钕(III) 进口、国产 Neodymiumtrifluoride 含量BR，98%
无水二进口、国产 Potassiumphosphatedibasic 含量CP，98%
无水二进口、国产 Sodiumphosphatedibasic 含量97%
无水肌盐进口、国产 Creatinephosphatesodiumsalt 含量98.5%
无水三进口、国产 TSP 含量99%
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。