Trelief™ SoSoo Cloning Kit Ver.2/克隆系列/无缝克隆技术,微量连接/擎科生物TSINGKE

¥1060
擎科生物
武汉
2021-08-10 12:02

北京擎科生物科技有限公司

我要认领
北京擎科生物科技有限公司
张楠
18622657960
zhangnan@tsingke.net
产品属性
保存条件-25 ℃ ~-15℃保存1年,避免反复冻融。
英文名Trelief™ SoSoo Cloning Kit Ver.2
数量充足
供应商北京擎科生物科技有限公司
规格20次
产品说明
Trelief ™ SoSoo Cloning Kit Ver.2
【产品特点】
快速:反应仅需15 min
简单:不受片段酶切位点影响,无需对片段进行酶切
高效:阳性率可达95%以上
无缝:不引入额外序列
低浓度、高GC、长片段克隆效率高

【产品简介】
Trelief TM SoSoo Cloning Ver.2试剂盒采用的是无缝克隆技术,适合任意方法线性化的质粒载体与单个或多个DNA片段实现快速、高效、无缝拼接,且不依赖限制性内切酶位点。且解决了低浓度、高GC、长片段等克隆效率低的难点。可对目标质粒上某个位点或者多个不连续位点同时进行定点突变。

【产品组成及保存】
-25 ℃ ~-15℃保存1年,避免反复冻融。
组分规格(20 次)
2×SoSoo Mix100 µL
Control Template(10 ng/µL)10 µL
Control Vector(10 ng/µL)*10 µL
*线性化质粒,抗性为Amp,含M13F/R序列。

【操作流程】
按照如下体系配制反应液,混匀瞬时离心后上机。50℃15 min
组分体积
2×SoSoo Mix5 µL
插入片段 1X1 µL*
............
插入片段 nXn µL
线性载体Y µL*
ddH2OUp to 10 µL

*载体与插入片段的摩尔比为12~110。多片段连接时各片段之间摩尔比为11
pmols=(质量ng×1000/(片段长度 bp×650 daltons)。
公式简化后V载体:V片段=摩尔比×B载体C片段 /B片段C载体)
例如:
5 kb线性化载体(20 ng/ µL)与2 kb的插入片段(100 ng/ µL)以摩尔比15连接。
载体和片段的体积比计算为:
V载体:V片段=1/5 ×(5 ×100/2×20)=2.5所以反应体系为
组分体积
2×SoSoo Mix Plus5 µL
插入片段1.4 µL
线性载体3.6 µL
 ddH2OUp to 10 µL

【问题讨论】
Q1:使用SoSoo重组试剂盒是否需考虑移码问题?
A1:需要,可以在同源臂序列的3’端删减原有碱基或添加1-2个额外碱基来保证读码框不发生滑动。

实例分享】
使用Trelief TMSoSoo Cloning Kit Ver.2,将5个长度为500 bp的目的片段插入载体pcDNA3.1+)中。结果显示插入成功率均为7/7

【公司简介】
北京擎科生物科技有限公司(Tsingke Biotechnology Co., Ltd.)是一家合成生物学国家高新技术企业,从事合成基因组学与生物合成产品的研究及开发。业务范围涵盖合成基因组学产品及服务、生命科学研究设备及原料、生物制造CRO/CDMO三大方向。
公司总部位于北京,运营实体和实验室遍布全国,业务覆盖中国并延伸至美国、德国等多个海外国家,为全球约12万用户提供服务与产品。截至202106月,公司现有员工1600名,拥有97项专利及核心技术,其中超40项为发明专利。使用擎科生物服务和产品客户发表文章累计超过3793篇,影响因子累计达到12316.48
北京擎科生物科技有限公司
电话:400-668-3730
地址:北京市经济开发区经海四路156号院5号楼401
网址:www.tsingke.com.cn



本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。