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红辣椒轻斑病毒PCR试剂盒

价格：¥1490

品牌：信裕生物

产地：国产/进口

最新更新日期：2021-08-10 12:37

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上海信裕生物科技有限公司

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公司：上海信裕生物科技有限公司

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产品属性

数量

英文名	Paprika Mild Mottle Virus(PaMMV)

保质期

一年

供应商	上海信裕生物科技有限公司

保存条件

-20℃

产品说明

红辣椒轻斑病毒PCR试剂盒
Paprika Mild Mottle Virus(PaMMV). PCR Kit

产品及特点
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀，操作需在冰上进行。
Taq：扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶，其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为10-5 左右。其产物未端带有A，可直接用于TA 克隆。
Pfu：目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶，碱基出错率为 10-6，但扩增效率低于Taq 酶，一般能很好的扩增2kb 以下的片段。其扩增速度约为500bp/min 左右。其产物为平未端，须加A后才可用于TA 克隆。
Taq Plus：Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu 高，保真度比Taq 好。其扩增速度约为1000bp/min 左右。其产物未端带有A，可直接用于TA 克隆。含染料PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的PCR MasterMix 反应完后加入上样缓冲液后电泳检测。

产品名称	方法	规格	价格
红辣椒轻斑病毒LAMP试剂盒	LAMP	50次	2490元
红辣椒轻斑病毒PCR试剂盒	PCR	50次	1490元
红辣椒轻斑病毒染料法荧光定量PCR试剂盒	染料法	50次	2490元
红辣椒轻斑病毒探针法荧光定量PCR试剂盒	探针法	50次	3490元

它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增红辣椒轻斑病毒，与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分

成分	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	试剂一	1 mL（红盖）
超纯水	试剂二	1 mL（亮黄色）
红辣椒轻斑病毒PCR引物混合液	试剂三	100 μL（白盖）
红辣椒轻斑病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	试剂四	50 μL（黄盖）
核酸释放剂（试用装）	试剂五	20 次（1 mL，绿盖）
使用手册	试剂六	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品，则需要做N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加10μL 补骨脂PCR 阳性对照的1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在PCR 时需要增加一个PCR 阳性对照和一个PCR 阴性对照，故需要设置N+4 个反应。在N+4 个PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
红辣椒轻斑病毒PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18 μL	--
PCR 阳性对照（红辣椒轻斑病毒PCR阳性对照的 1000 倍稀释液）	--	--	18 μL

按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应（35 个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测PCR 产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10 倍后重复PCR 扩增以排除PCR 抑制剂的感染。

红辣椒轻斑病毒PCR试剂盒常见问题与解决方法:

常见问题	可能原因	解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。	PCR反应体系或反应条件不合适。	使用梯度PCR摸索PCR反应条件。
	PCR试剂保存不当失去活性。	2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
	引物设计问题。	尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。	不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。	使用新鲜的试剂。
	加入组织裂解液过量。	增大反应体系，或减少裂解液的用量。
	样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。	裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
	模板加入量不适合。	在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
	PCR循环数不足。	适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增	PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。	增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
	PCR引物错配。	重新设计PCR引物。
	配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。	PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带	操作工具或试剂污染。	实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
阴性对照出现目的条带	样本间交叉污染。	每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！