蜂房小甲虫PCR试剂盒
Aethina tumida产品简介：
蜂房小甲虫（Aethina tumida）是蜂群的寄生虫。它的成虫和幼虫以蜂子、 蜂蜜和蜂花粉为食,导致幼蜂死亡、蜂蜜发酵及巢脾被破坏。小甲虫加速破坏蜂 巢,使成年蜜蜂逃逸。其损害程度可能取决于气候条件等因素,相比温度和湿度较 低的地区,蜂房小甲虫在较高的温度和高湿度下的危害一般更大。蜂蜜提纯设备 也是蜂房小甲虫潜在的繁殖场所,一旦蜂房小甲虫出现在这种设备中,这种危害 会更严重。从卵发育到成虫,蜂房小甲虫需要 3~12 周,周期长短取决于湿度、温 度和食物供应。成虫飞行时所到之处,所有规模的蜂群都会被侵扰，因此蜂房小 甲虫的快速检测具有重要的意义。本试剂盒根据 PCR 原理开发，它具有下列特 点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增蜂房小甲虫。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。
规格及成分：| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 100935 | 1 mL（亮黄色） |
| 蜂房小甲虫PCR 引物混合液 | 13-68100yw | 100 μL（白盖） |
| 蜂房小甲虫PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL） | 13-68100pc | 50 μL（黄盖） |
| 天净沙核酸释放剂（试用装） | 61202 | 20 次（1mL、绿盖） |
| 使用手册 | 13-68100sc | 1份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂， 本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 | 样品管
N+2 个 | PCR
阴性对照 | PCR
阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 蜂房小甲虫PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| 样品制备阴性对照（超纯水） | - | 18 μL | - |
| 蜂房小甲虫PCR的 10000 倍稀释液 |
- |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5min |
PCR反应
（35 个循环） | 95℃ | 15 sec |
| 55℃ | 15 sec |
| 72℃ | 60 sec |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 109bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
