本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠TNF-α单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的TNF-α会与单 抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗体和辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与 亲合素特异性结合；抗小鼠TNF-α抗体与结合在单抗上的小鼠TNF-α结合而形成免疫复合物，游离的成分被 洗去。加入显色底物，若反应孔中有TNF-α，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在 450nm处测OD值，TNF-α浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中TNF-α浓度。