福林酚

¥300 - 3500
博湖
进口、国产
2021-08-10 13:49

上海博湖生物科技有限公司

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上海博湖生物科技有限公司
韩丽君
18117197628 021-57763112
3004987436@qq.com
产品属性
数量35
英文名Folin & Ciocalteu’s phenol reagent
CAS号详见说明书
保质期3年
供应商上海博湖
保存条件RT
规格
产品说明
免疫球蛋白:



产品参数:
产品名称福林酚
英文名称Folin & Ciocalteu’s phenol reagent
货号BH-DB020
产品名称:福林酚
有效期:3

别名:Folin-Phenol
英文名称:Folin & Ciocalteus phenol reagent
储存条件:RT
外观(性状)淡黄色液体
单位:
1Folin-酚试剂甲:需客户自备或者选用对应的试剂盒)
1g Na2CO3溶于50mL 0.2moL/L NaOH中,再把0.5g(硫酸铜)CuSO4·5H2O溶于100mL 1%的酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液,然后将前者50mL与后者1mL混合,现用现配,此试剂只能使用一天,过期失效。
2Folin-酚试剂乙:
本试剂的浓度为1moL/L,此为Folin-酚试剂应用:液。Folin-酚试剂平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。
3Folin -酚法测定原理:
在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便,灵敏度:比双缩脲法高100倍,定量范围为5100μg蛋白质。
注意事项: 
 1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
 2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
 3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
 4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

操作步骤
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。

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