人可溶性血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号：CSB-E11885h
检测范围：0.8 ng/ml, - 50 ng/ml,
最低检测限：0.2 ng/ml,
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人VEGFR-1，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中VEGFR-1含量。
说明
l试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
l浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
l中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
l刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗VEGFR-1抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗VEGFR-1抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的VEGFR-1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）： 2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)： 1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）： 1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）： 1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）： 1×120μl/瓶（1：100）。
7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）： 1×120μl/瓶（1：100）。
8.底物溶液（TMB Substrate）： 1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液（Stop Solution）： 1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 ng/ml,，做系列倍比稀释后，分别稀释50ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml, 6.2 ng/ml, 3.2 ng/ml, 1.6 ng/ml, 0.8 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,，临用前15分钟内配制。
如配制25ng/ml,标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50 ng/ml,的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
