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- 上海泽叶生物科技有限公司
- Proteus mirabilis变异变形杆菌PCR试剂盒
￥1490
泽叶生物
中国/德国
2021-08-12 11:00
我要认领上海泽叶生物科技有限公司
赵琼
shzeysw@163.com
产品属性
产品说明
PCR使用注意事项1.试剂盒中的所有组份，在室温～37℃完全融化后，用移液枪吸打混匀或将Microtube上下颠倒混匀，尽量避免剧烈振荡。混合10×LA PCR Buffer, LA Taq时, 为防止起泡或酶失活，需注意仔细轻轻混合。融化后的各组份在使用前请置于冰中保存。2.配制反应液时，使用移液器轻轻吸打混合，不能剧烈振荡。3.扩增长片段DNA时的引物特异性要高。引物的推荐长度为25-30 mers。4.尽量使用高纯度的模板DNA。扩增长片段DNA时的模板使用量为通常PCR时的4～5倍。
步骤、过程：构建一段寡核苷酸探针：5’端标记荧光染料报告基团，3’端标记淬灭染料基团。当探针保持完整时，淬灭基团的靠近会通过空间上的荧光共振能力转移（FRET）而显著降低由报告染料基团发射的荧光。如果存在目标序列，探针便会在其中一个引物结合位点的下游发生退火，并随着引物的延伸通过Taq DNA聚合酶的5’核酸酶活性，完成切除。探针的切除将会引起：将报告染料基团和淬灭染料基团进行分离，增强了报告染料基团的信号。将探针从目的链上去除，使引物继续沿模板链末端延伸。因此，探针的介入并不会抑制整个PCR过程。内源性对照：数字 PCR 不依赖内源性对照品进行参考测量。对于内源性对照进行扩增可用于对加入至反应的样品 RNA 或 DNA 的量进行标准化。对于基因表达定量，研究者采用过 ß-肌动蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶 (GAPDH)、核糖体 RNA (rRNA) 或其他 RNA 作为内源性对照。标准品：因为数字 PCR 通过阴性与总平行样的比例确定分子绝对计数，所有无需标准品。由于样品量会除以校准品的量，所以标准曲线中的单位便被去除了。因此，对于标准品来说，只需知道其相对稀释比。对于相对定量，任何含有合适目标分子的 RNA 或 DNA 储存液都可用于制备标准品。每经过一个循环，就会有更多的报告基因染料分子从各自的探针上切断，荧光强度会随着合成的扩增片段数量的增加而增加。
