巴尔通体(BE)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

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维伯鑫
2021-08-12 11:01

广州维伯鑫生物科技有限公司

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产品说明
【产品名称】
通用名称:巴尔通体(BE)核酸检测试剂盒(荧光PCR
Name BartonellaelizabethaeDetection Kit Real-Time PCRMethod

【包装规格】25T/盒、50T/

【预期用途】
巴尔通体是一群革兰染色阴性、氧化酶阴性、营养条件要求苛刻、兼性细胞内寄生的需氧杆菌,主要寄生在人、猫、狗和啮齿动物等血管内皮细胞和红细胞内,通过跳蚤、体虱和白蛉等传播,可引起人类卡瑞恩病、猫抓病、战壕热、杆菌性血管瘤、心内膜炎等疾病[1]。巴尔通体引起的相关疾病属于被忽视的疾病,但引起的心内膜炎严重影响到人类健康,造成卫生经济负担[2]本试剂盒利用实时荧光定量PCR原理,定性检测巴尔通体,对巴尔通体的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,针对巴尔通体基因高度保守区设计一对异性引物和探针,利用相应仪器对PCR过程进行实时监测,实现检测结果的定性分析,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】
包装规格25T/50T/
BE反应液 500μL×1 500μL×2
酶液25μL×1 50μL×1
BE阳性质控品 50μL ×1 50μL ×1
阴性质控品 250μL ×1 250μL ×1
说明:不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5,有效期12个月。

适用仪器ABI 、安捷伦MX3000P/3005PLightCyclerBio-RadEppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】适用于动物和人体的血液、组织等多种样本。

【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融

使用方法
  1. 样品处理(样本处理区)
  1. 样本前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL1.5mL灭菌离心管中;液体样本直接取100μL1.5mL灭菌离心管中
  1. 核酸提取
推荐采用广州维伯鑫生物科技股份有限公司生产的核酸提取或纯化试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提取,请按照试剂说明书进行操作。
  1. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为NN=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;反应管数每满10份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:
试剂BE反应液酶液
用量(样本数为N20μL1μL
将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21μL/管。
  1. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
  1. PCR扩增(核酸扩增区)
  1. 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内
  2. 设置好通道、样品信息,反应体系设置25μL
荧光通道选择:检测通道(Reporter DyeFAM淬灭通道(Quencher DyeNONEABI系列仪器请勿选择ROX参比荧光,选择None即可

注意事项
1.所有操作严格按照说明书进行;
2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
3.反应液应避光保存;
4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
[1]Fournier PE, Thuny F, Richet H, et al. Comprehensive diagnostic strategy for blood culture-negative endocarditis: a prospective study of 819 new cases[J]. Clinical Infectious Diseases: an Official Publication of the Infectious Diseases
Society of America, 2010, 512: 131-140
[2] Lisby G, Gutschik E, Durack DT. Molecular methods for diagnosis of infective endocarditis[J]. Infectious Disease Clinics of North America, 2002, 162: 393-412

【生产企业】
企业名称:广州维伯鑫生物科技股份有限公司编:510663
生产地址:广州高新技术产业开发区科学城科丰路31G11201
电子邮箱:info@vipotion.com话:020-66377266
公司网址:http://www.vipotion.com真:020-66377267