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| 服务名称 | 慢病毒包装 |
| 提供商 | YRbio |
慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的儿率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。
所以，在体外实验及体内实验的研究中，慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一， 并且正在获得越来越广泛的应用。
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装， 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染。
现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些，所以应用较多。
目前市面上常见的商业化慢病毒包装系统较多，其中常用的有Clontech 、Invitrogen 等公司的相关产品。赢润生物通过大量实验摸索，博采众家之长，建立起了一套稳定、可靠、高效的慢病毒包装系统。这套慢病毒包装系统， 其穿梭载体主要来自Clontech公司，包括以下载体：
| 载体名称 | 出品公司 | 用途 | 启动子 | 荧光标记 | 真核筛选标记 |
|---|---|---|---|---|---|
| pLVX-DsRed-Monomer-Nl | Clontech | 表达基因 | CMV | DsRed-Monomer | Puro |
| pLVX-AcGFPI-N1 | Clontech | 表达基因 | CMV | AcGFP1 | Puro |
| pLVX-IRES-tdTomato | Clontech | 表达基因 | CMV | tdTomato | 无 |
| pLVX-lRES-ZsGreen1 | Clontech | 表达基因 | CMV | ZsGreen1 | 无 |
| pLVX-lRES-Neo | Clontech | 表达基因 | CMV | 无 | Neo |
| pLVX-lRES-puro | Clontech | 表达基因 | CMV | 无 | Puro |
| pLVX-ZsGreenl-Neo | Yrbio | 表达miRNA | CMV | EGFP | Neo |
| pLVX-ZsGreenl-puro | Yrbio | 表达miRNA | CMV | EGFP | Puro |
| pLVX-shRNA1 | Clontech | 表达shRNA | hU6 | 无 | Puro |
| pLVX-shRNA2 | Clontech | 表达shRNA | hU6 | ZsGreen1 | 无 |
| pLVX-shRNA3 | Yrbio | 表达shRNA | hU6 | 无 | Neo |
| pLVX-shRNA4 | Yrbio | 表达shRNA | hU6 | ZsGreen1 | Neo |
| pLVX-shRNA5 | Yrbio | 表达shRNA | mU6 | ZsGreen1 | Neo |
| pLVX-shRNA6 | Yrbio | 表达shRNA | h7SK | ZsGreen1 | Neo |
| pLVX-shRNA7 | Yrbio | 表达shRNA | hH1 | ZsGreen1 | Neo |
您可以根据需要，选用合适的穿梭载体，用来装载目的基因或者目的shRNA 。在实际使用过程中，我们发现Clontech配套的慢病毒包装质粒不是很好用，出毒效率不高，所以， 我们采用了Invitrogen公司的惺病毒包装质粒来进行配套，其包括pLPl 、pLP2 、pLP/VSVG三个质粒。将这三个质粒与Clontech的慢病毒表达载体进行混合，导入293T包装细胞，能够高效地出毒。
| 实验步骤 | 服务描述 | 服务周期 |
|---|---|---|
| 1 | 客户选择目的基因、穿梭载体，Yrbio 负责实验设计 | 1 - 2 周 |
| 2 | 客户提供目的基因，或从Yrbio 基因库中购买该基因 | 1周 |
| 3 | 将目的基因的CDS 区构建至穿梭载体上 | 2 - 3 周 |
| 4 | 慢病毒包装、出毒 | 3 - 4 周 |
| 实验步骤 | 服务描述 | 服务周期 |
|---|---|---|
| 1 | 客户选择靶基因或目的shRNA、穿梭载体， Yrbio 负责实验设计 | 1 - 2 周 |
| 2 | 将目的shRNA 构建至穿梭载体上 | 2 - 3 周 |
| 3 | 有效shRNA 筛选( 筛靶套餐，保证至少一条shRNA有效，可选) | 3 - 4 周 |
| 4 | 慢病毒包装、出毒 | 3 - 4 周 |
| 表达基因或shRNA | 滴度 | 价格 | 周期 |
|---|---|---|---|
| 表达基因（<2K） | 1x108 TU | 3~4周 | |
| 2x108 TU | 3~4周 | ||
| 更高滴度 | 3~4周 | ||
| 表达基因（2K~2.5K） | 1x108 TU | 3~4周 | |
| 2x108 TU | 3~4周 | ||
| 更高滴度 | 3~4周 | ||
| 表达基因（2.5K~3K） | 1x108 TU | 3~4周 | |
| 2x108 TU | 3~4周 | ||
| 更高滴度 | 3~4周 | ||
| 表达基因（>3K） | 询价： | 5~7周 | |
| 表达shRNA（单条） | 1x108 TU | 3~4周 | |
| 2x108 TU | 3~4周 | ||
| 更高滴度 | 3~4周 | ||
| 表达shRNA（三条，保证至少一条有效） | 1x108 TU | 3~4周 | |
| 更高滴度 | 3~4周 | ||
| 服务内容 | 滴度 | 服务价格(元) | 服务周期 |
|---|---|---|---|
| Lv-AcGFP1(表达基因用对照)(绿色荧光) | l x108TU | 3-4 周 | |
| 2x108TU | 3-4 周 | ||
| 更高滴度 | 3-4 周 | ||
| Lv--ZsGreen1(表达基因用对照)(绿色荧光) | l x108TU | 现货 | |
| 2x108TU | 现货 | ||
| 更高滴度 | 3-4 周 | ||
| Lv—DsRed-Monomer(表达基因用对照)(红色荧光) | l x108TU | 3-4 周 | |
| 2x108TU | 3-4 周 | ||
| 更高滴度 | 3-4 周 | ||
| Lv-tdTomato(表达基因用对照)(红色荧光) | l x108TU | 现货 | |
| 2x108TU | 现货 | ||
| 更高滴度 | 3-4 周 | ||
| Lv-NC-shRNA(表达shRNA用对照)(绿色荧光) | l x108TU | 现货 | |
| 2x108TU | 现货 | ||
| 更高滴度 | 3-4 周 |
