1.A. Western-blot检测
服务内容
1. 从细胞、人或动物组织、细菌、植物、血清等样品中提取蛋白
2. 对蛋白进行定性及定量分析
3. Western blot检测
（1）电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分离蛋白样品 
（2）湿法转印 
（3）杂交：用抗体鉴定膜上的特定蛋白
（4）化学发光检测（ECL），胶片曝光，ImageJ软件读取灰度值（可选）
4. 预实验及正式实验：帮助客户设计样品上样顺序
5. 免费进行胞浆蛋白内参检测（胞核蛋白内参需收取费用）
样品要求（样品处理及保存见后）
1. 细胞＞1×107；组织＞50mg；细菌湿重＞50mg；植物＞100mg；血清＞50ul
2. 样品蛋白浓度＞1mg/ml，蛋白量＞200ug/样品

收费标准
1200元/膜，10个加样孔

客户提供材料
1. 新鲜或正确保存的样品 
2. 目的蛋白的一抗 
3. 阳性对照样品（尽量提供） 
4. 相关文献（可选）


提交给客户的结果
1、预实验曝光结果（胶片及扫描图），《预实验采取2个一抗稀释度》
2、正式实验曝光结果（胶片及扫描图） 
3、完整实验报告 
4、ImageJ软件读取灰度值（可选）
服务项目说明
1. 提供的样品蛋白量与目的待检测的蛋白数量有关。
2. 胞浆、胞核蛋白抽提样品来源为：哺乳动物细胞、组织。如果1个样品分别提取胞浆、胞核蛋白后，以2个样品计算。另收取胞浆、胞核蛋白提取费用（100元/样品）。
3. 每张膜样品数量为1-8个，不足8个以8个收取。9-16个样品为2张膜，17-24个样品为3张膜；以此类推
举例：7个样品，1个目的蛋白，算1张膜；有9个样品，1个目的蛋白，算2张膜
7个样品，2个目的蛋白，算2张膜，有9个样品，2个目的蛋白，算4张膜
以上为一般算法。如果客户样品数量需要按照组别等来进行上样时需要重新确定
每张膜的上样量及膜的张数。
4. 选择部分样品进行预实验，参考目的蛋白一抗说明书进行2个稀释度的预实验
5. 向客户反馈预实验结果，等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验
6. 请您提供质量保证的一抗（或委托我公司代购）。抗体的使用量通过预实验后进行确认，一般不回收使用一抗。
7. 如果需要对膜上蛋白进行抗体剥离（洗脱或者stripping）的，请提前说明（收费不同）。
8. 建议提供目的蛋白阳性表达样品（纯蛋白、有阳性表达的细胞或组织、商品化的阳性对照产品等）作为阳性对照。
9. 免费内参检测为：beta-actin，beta-tubulin，GAPDH，如果同时检测胞浆、胞核蛋白内参时胞核蛋白内参（Lamine B1）需要收取费用（100元/膜）。
10. 如需进一步数据分析：ImageJ软件读取灰度值、Normalization处理，请另询价。
11. WB特殊要求请咨询
附：样品处理及保存（极为重要）
1、悬浮细胞样品：把细胞及培养液一起收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。
2、贴壁细胞样品：
2.1 胰酶消化：用胰酶将细胞消化后，含血清的培养基中和胰酶，吹打，收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。
2.2 细胞刮子收集细胞：对于某些蛋白（即对胰酶比较敏感或者实验特殊要求，如E-Cadherin不易用胰酶消化后进行WB检测），直接用细胞刮子刮下细胞，连同培养基收集到15ml或者50ml离心管中，1500rpm离心3min，弃去上清；加入10ml 冷PBS轻轻吹打，1500rpm，4℃离心3min，弃去上清；反复2次；第二次弃去上清后，用1ml 冷PBS重悬细胞，移入1.5ml微型离心管，2500rpm（500g），4℃离心5分钟，尽量去除所有残留上清，于-80度或者液氮冻存待用。在避免冻融的情况下，一般保存1年，建议尽快检测。 
3、动物组织样品：取下合适的动物或者人的组织样品后用预冷的PBS或者生理盐水漂洗，尽量除尽残留血液，用滤纸把多余PBS吸取干净。把组织分成约50mg大小（依据实验目的需要进行调整），用锡纸分别包装好或者用冻存管装好，于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年，建议尽快检测。
4、植物样品：取得待测植物样品后，用蒸馏水把泥土漂洗干净，用滤纸把多余水分吸取干净，分装成合适大小于-80度或者液氮中保存。在避免冻融的情况一般保存1年，建议尽快检测。
5、细菌样品：细菌培养完成后，10000rpm离心5min收集细菌，加入PBS吹打，10000rpm离心5min，弃去上清；反复3次，弃去上清后于-80度或者液氮冻存待用。
6、若要检测磷酸化蛋白，请在3个月内进行。长时间保存样品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而检测不到磷酸化条带。
7、提取胞浆、胞核蛋白的样品应尽量采用新鲜样品，因为冻存会使细胞浆、细胞核破裂。
8、血液样品（血浆中蛋白）：3000rpm离心20min后收集上清，分装后于-80度或者液氮冻存待用。3个月以内检测。
9、运输时间较长或长距离运送样品时采用干冰或者液氮。
10、样品的实际需要量请打电话咨询。
抗体保存及使用应严格按照抗体说明书进行保存，避免出现不必要的麻烦。在-20度保存呈液体状态的抗体请不要分装。新购抗体要在2-3月以内进行WB检测等实验，以验证抗体的有效性。一般新购抗体有非特异条带等问题出现，2-3个月内没有反馈给抗体公司，抗体公司将不再受理投诉。
公司网址：www.pregene.com