单细胞裂解液(RNA)

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xuanya
美国/中国
2021-08-16 12:08

上海烜雅生物科技有限公司

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上海烜雅生物科技有限公司
黄经理
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产品属性
保存条件-20℃
保质期两年
英文名Single Cell Lysis Solution(RNA)Embryonic Cell Lysis Solution
数量900
供应商上海烜雅生物科技有限公司
规格1mL
产品说明
单细胞裂解液(RNA)产品及特点:
单细胞裂解液(RNA专用)是单细胞RNA提取专用裂解液,产品经过多次优化,含有多种去污剂、变性剂和盐,可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏,维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和 RT-PCR 等试验。 本产品足够使用200次以上。 胚胎裂解液用于将卵裂球(blastomere,含2-8个细胞)分离成单个胚胎的溶液,得到的单个细胞如果用于DNA分析(如全基因组扩增或 PCR),则可直接 用于单细胞裂解液(DNA 型)裂解;如果用于 RNA 分析(如 RT-PCR),则可直 接用于单细胞裂解液(RNA 型)裂解。本产品不能用于胚囊(blastocyst,含 70-100 个细胞)。

单细胞裂解液(RNA)运输及保存:
低温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂:PBS 溶液(可向xuanya另购)

单细胞裂解液(RNA)二、用培养细胞或实体组织制备单细胞:
3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织,将细胞重悬于自备的液体细胞培养基 中。
4. 按常规方法对细胞进行计数。
5. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中,400 g 离心 4 分钟沉淀细胞,小心弃 上清(培养基)。
6. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中,使其终浓度为 2-80 个细胞 /uL。
7. 在干净培养皿上点加数个 5 uL PBS 溶液小液滴,加入 5 uL 细胞悬浮液到第 一个小液滴中,然后再从第一个小液滴中转移 5 uL 到第二个小液滴,如此系 列稀释样品数次,使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞,放冰上待用。

三、用卵裂球(blastomere,2-8 细胞胚胎)制备单个细胞:
8. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液(CAT#:130806)的小液滴。
9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
11. 在最有一个液滴中,卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
12. 取单个细胞,转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200 uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照(2.5 uL 样品中不含细胞)。

单细胞裂解液(RNA)四、用单细胞裂解液裂解细胞
14. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品,确认含一个细胞后,将其转移到一 个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。最好同时设置无样品的阴性对照(2.5 uL 样品中不含细胞)。
15. 在 2.5uL 样品中, 显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
16. 裂解后可以放冰上待用,如果长期不用,可以放-80℃保存。一般-80℃放置 过 30 分钟到一周时间的样品 PCR 扩增效果最好。

五、单细胞裂解物的 PCR 扩增
17. 细胞裂解物从-80℃中取出后,先在 65℃中保温 10 分钟,然后在放冰上放置 待用。
18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行 PCR。

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