精浆柠檬酸定量检测试剂盒
产品简介：
精浆柠檬酸定量测定对于判断精子质量有一定的作用。精浆柠檬酸定量检测试剂盒的测定原理是柠檬酸与吲哚在酸和加热的情况下形成复合物，该复合物通过96孔板测定仪或分光光度计在470nm处测定吸光值，同时做柠檬酸的标准曲线，通过标准曲线来计算精液中柠檬酸的具体含量，即对柠檬酸进行定量检测。精浆柠檬酸定量试剂盒是根据Karvonen和Malm的方法进行改良后的方法，在0.14～2.24mM浓度范围内有较好的线性关系。用分光光度计测定吸光值，若采用1～3ml的比色杯时，应按照比例调节精液和试剂的量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
操作步骤：
制备标准曲线：用ddH20稀释Citrate标准(2.24mM)。取1.5ml离心管加入150μl Citrate标准(2.24mM)和150μl ddH20混合，即获得浓度为1.12mM的Citrate标准；取1.5ml离心管加入150μl Citrate标准(1.12mM)和150μl ddH20混合，即获得浓度为0.56mM的Citrate标准，依次对倍稀释，分别获得浓度为0.28mM和0.14uM的Citrate标准。
制备样本：1000g离心精液样本10min，取上层精浆置于新的1.5ml离心管，储存于-20℃待检。
样本预处理：解冻去除精子的精浆，在混旋器上充分混匀。取若干新的1.5ml离心管，每管加入50μl ddH20，用正向置换型加样器加入5μl混匀好的精浆，即获得55μl的预处理样本，每个精浆样本应稀释2份作为复测。
样本检测：
脱蛋白：向55μl预处理样本中加入12.5μl Protein Dilution A和B，混匀。
离心：室温放置15～20min，8000g离心5min。
上样：取50μl上清置转移至1.5ml离心管中。同时取新的1.5ml离心管加入2份50μl ddH20作为空白对照，取新的1.5ml离心管分别加入2份50μl Citrate标准，即浓度为2.24mM、1.12mM、0.56mM、0.28mM、0.14mM的标准品个2份。
显色反应：向每管样本中加入50μl Indole Developer，混匀。向每个样本中加入0.5ml浓盐酸，封口，在通风橱中充分混匀，50℃水浴中加热20min，混匀，冰水冷却15～20min。
测OD值：在通风橱中用正向置换型加样器将250μl液体小心移入96孔板中，以ddH20作为空白管调节零点，用酶标仪或96孔读数板在470nm波长下读取结果。
计算结果：
做柠檬酸标准曲线，从标准曲线上读取柠檬酸浓度。
乘以稀释倍数(16倍)得到未稀释精浆中的柠檬酸浓度(mM)。
乘以1次射精的精液体积，得到每次射出的精液中柠檬酸的含量(μM)。
参考值：一次射精柠檬酸浓度≥13μM。
精浆柠檬酸定量检测试剂盒注意事项：
建议每次测定时都做标准曲线，以使标准更准确，另外标准品需避免反复冻融。
如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样本后重新测定。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
