彗星实验

背景：

单细胞凝胶电泳技术(SCGE)又称彗星试验(comet assay)，其原理是：当各种内外源DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜等膜结构受到破坏，细胞内的蛋白质、RNA以及其它成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。在中性条件时，DNA片段可进入凝胶发生迁移，而在碱处理和碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来，由于这些DNA的分子量很小，所以在电泳过程中会离开核DNA向阳极移动，形成彗星状的图像，而未损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断片越多并且片段越小，电泳时迁移的DNA量也就越大，迁移距离越长，荧光显微镜下可观察到尾长增加、尾部荧光强度增强。在一定条件下，DNA迁移距离(彗星尾长)和DNA含量(荧光强度)分布与DNA损伤程度呈线性相关，因此，尾矩(尾部DNA的含量与尾长的乘积)成为定量测定单个细胞DNA损伤程度的主要依据。

技术参数：